产品名称 | 鸡前脂肪细胞 | 组织来源 | 腹部腹股沟皮下白色脂肪 |
英文名称 | Chicken Preadipocytes | 种属 | 三黄鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2702 |
方法简介 实验室分离的鸡前脂肪细胞采用胶原酶消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡前脂肪细胞经成脂诱导功能验证，诱导成脂后，经油红O定性检测阳性，成脂染色数占比>60%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 鸡前脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡前脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SPF级鸡胚(E10-E12)，取皮下脂肪或棕色脂肪组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、胶原酶、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS、IBMX、地塞米松、胰岛素
分离纯化步骤
取实验动物脂肪组织，剪碎后加入II型胶原酶(1mg/mL)37度振荡消化1-2小时
消化液经70um滤网过滤，100g离心10分钟收集沉渣(含前脂肪细胞和脂肪细胞)
去除上层脂肪层，将沉渣重悬于PBS中，再次离心纯化
沉淀细胞接种于培养皿中，贴壁细胞即为前脂肪细胞/脂肪间充质干细胞
原代培养要点
前脂肪细胞使用DMEM/F12+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养
细胞呈梭形贴壁生长，融合达80-90%时传代
诱导分化：换用分化培养基(DMEM+10%FBS+0.5mM IBMX+1uM地塞米松+10ug/mL胰岛素)诱导48-72小时后换维持培养基
脂肪细胞培养7-14天后可观察到明显脂滴积累，Oil Red O染色阳性
常见问题优化
前脂肪细胞得率低：延长胶原酶消化时间至2小时，适当提高酶浓度
分化效率低：确保诱导培养基中各组分新鲜配制，IBMX需现用现配
细胞老化：控制传代次数在5代以内，早期代次分化潜能更佳
大鼠β3-微管蛋白(TUBB3)elisa试剂盒 | kyse150人食管鳞癌细胞 |
大鼠甲状腺激素转运蛋白(TTR)elisa试剂盒 | 大鼠子宫内膜基质细胞 |
大鼠组织型谷氨酰胺转移酶IgG抗体(tTG-IgG)elisa试剂盒 | 大鼠腮腺细胞 |
大鼠总甲状腺素(TT4)elisa试剂盒 | SGC-7901-GFP (人胃腺癌细胞(绿色荧光)) |
大鼠CD42D分子(CD42D)elisa试剂盒 | 人类原巨核细胞型白血病细胞UT-7(STR鉴定正确) |
大鼠CD47分子(CD47)elisa试剂盒 | 小鼠脊髓神经元细胞 |
猪线粒体呼吸链复合物Ⅴ（COX Ⅴ）elisa试剂盒 | 大鼠原代肠道干细胞 |
RM-1+LUC小鼠前列腺癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | VCAM1基因过表达细胞株 |
ID8小鼠卵巢上皮癌细胞专用培养基 | BICDL1基因过表达细胞株 |
人原代横纹肌细胞专用培养基 | NAALADL2基因过表达细胞株 |
BT483细胞专用培养基 | MTMR10基因过表达细胞株 |
人原代宫颈成纤维细胞专用培养基 | CYP4A11基因过表达细胞株 |
鸡前脂肪细胞XWLC-05+GFP细胞专用培养基 | ALG6基因过表达细胞株 |
C2C12细胞专用培养基 | FBXW2基因过表达细胞株 |
脂肪组织处理：无菌取鸡腹部白色脂肪组织，PBS 清除血管与结缔组织
胶原酶消化：Ⅰ 型胶原酶 37℃震荡消化 1h，分离基质血管组分
分层纯化：离心弃上层漂浮脂肪油滴，收集底层前脂肪细胞沉淀
基础扩增培养：高糖完全培养基接种，低密度培养避免提前分化
成脂诱导：细胞融合 100% 后加入诱导液（IBMX + 地塞米松 + 胰岛素）
维持分化：诱导 2 天后更换维持培养基，持续培养 8 天形成脂滴
鉴定冻存：油红 O 染色验证成脂能力，未诱导细胞分装液氮保藏
