鸡胚成纤维细胞

方法简介  实验室分离的鸡胚成纤维细胞采用胰蛋白酶消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的鸡胚成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 鸡胚成纤维细胞完全培养基(含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

鸡胚成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前置准备

实验动物：SPF级鸡胚(E10-E12)，取健康组织块约0.5-1g

试剂：0.25%胰蛋白酶、胶原酶、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)

分离纯化步骤

取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质

剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟

加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化

经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀

重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞

原代培养要点

成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形

使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养

每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代

原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态

常见问题优化

成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度

细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠

交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型

器械无菌准备：培养皿、镊子、滤网高温灭菌，预温基础培养基备用

胚组织解离：无菌取 9 日鸡胚躯干组织，剪碎至 1mm³ 组织块，PBS 反复漂洗去血污

酶解分离：0.1% 胶原酶 37℃水浴消化 40min，间断吹打释放成纤维细胞

筛滤纯化：100 目细胞筛过滤组织残渣，滤液离心收集细胞沉淀

原代铺板：高血清完全培养基重悬，高密度接种，孵箱静置 48h 促贴壁增殖

传代扩增：细胞融合 90% 后胰酶消化，按 1:3 比例分瓶扩增，去除上皮杂细胞

质控鉴定：镜检细胞梭形形态，无支原体污染后分装冻存，标注胚龄批次