鸡卵泡颗粒细胞
采用组织块贴壁法从来航鸡的卵泡颗粒细胞来源组织中分离目标细胞，经胶原酶 II 和 Dispase 联合消化后，通过密度梯度离心纯化目标细胞组分，接种于特异性包被（如胶原 I/明胶/多聚赖氨酸）的培养表面，使用组织特异性培养基（含 10% FBS 及针对性生长因子）培养；通过免疫荧光染色检测细胞类型特异性标志物表达，结合倒置显微镜形态学观察和分子生物学方法（RT-qPCR/Western blot）验证细胞身份与功能特性。
产品名称：鸡卵泡颗粒细胞
英文名称： Chicken Follicle Granulosa Cells
组织来源： ：鸡卵泡组织
默认种属 ：三黄鸡
产品规格：5×10^5Cells/T25
方法简介 实验室分离的鸡卵泡颗粒细胞采用先机械分离后胶原酶-胰蛋白酶联合消化法、并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡卵泡颗粒细胞经FSHR免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 鸡卵泡颗粒细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
一、实验前准备
1、实验动物选择健康产蛋期母鸡，实验前禁食12h。
2、备好试剂与仪器：2% EDTA-2Na溶液、含双抗的PBS缓冲液、0.2% Ⅱ型胶原酶、M199完全培养基（含5%FBS及1%双抗）、200目不锈钢筛、37℃恒温水浴锅、CO₂恒温培养箱等。
二、取材与预处理
1、翅下静脉注射2mL 2% EDTA-2Na溶液处死母鸡，用新洁尔灭浸泡消毒5min，无菌操作打开腹腔，剪取完整卵巢，剥离8-15g的健康卵泡，放入预冷的含双抗PBS缓冲液中。
2、用加双抗的PBS反复漂洗卵泡3次，彻底去除血污，剥净卵泡外膜、结缔组织及表面血管网。
三、细胞分离与消化
1、用手术刀在卵泡表面快速划1-2cm切口，完全释放卵黄，用PBS反复漂洗至无明显卵黄残留，留下卵泡膜（基膜+颗粒细胞层）。
2、将卵泡膜剪碎，加入4mL培养基，用1mL移液枪反复吹打1min，自然沉降5min后收集上清液。
3、向沉淀中加入4mL 0.2% Ⅱ型胶原酶重悬，37℃水浴消化30min，每5min震荡一次，消化完成后加入4mL含10%血清的M199培养基终止消化。
四、纯化与接种培养
1、用200目不锈钢筛过滤消化液，收集滤液后1200rpm离心5min，弃上清。
2、用M199培养基洗涤细胞沉淀2次，每次1200rpm离心5min，最后用完全培养基重悬细胞。
3、将细胞悬液接种至6孔培养皿，置于37℃、5% CO₂培养箱静置培养，12-24h首次换液，之后每2-3天换液一次，待细胞生长融合后即可开展后续实验。
1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。
2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。
3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。
4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。
5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。
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