鸡卵泡基膜细胞

鸡卵泡基膜细胞

采用组织块贴壁法从来航鸡的卵泡基膜细胞来源组织中分离目标细胞，经胶原酶 II 和 Dispase 联合消化后，通过密度梯度离心纯化目标细胞组分，接种于特异性包被（如胶原 I/明胶/多聚赖氨酸）的培养表面，使用组织特异性培养基（含 10% FBS 及针对性生长因子）培养；通过免疫荧光染色检测细胞类型特异性标志物表达，结合倒置显微镜形态学观察和分子生物学方法（RT-qPCR/Western blot）验证细胞身份与功能特性。

产品名称：鸡卵泡基膜细胞

英文名称： Chicken Follicular Basement Membrane Cells

组织来源： 鸡卵泡组织

默认种属 ：三黄鸡

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的鸡卵泡基膜细胞采用先机械分离后胶原酶反复消化法、并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的鸡卵泡基膜细胞经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 鸡卵泡基膜细胞完全培养基(含FBS、EGF、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

鸡卵泡基膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 试剂：M199 培养基、10% 鸡胚血清、青霉素链霉素、0.1%Ⅰ 型胶原酶、PBS。

2. 器械：解剖剪、弯镊、培养皿、筛网，选取产蛋期母鸡卵泡组织。

3. 耗材灭菌，提前配制完全培养基置于 37℃预热。

二、取材与预处理

1. 活鸡处死后打开腹腔，摘取发育良好的各级卵泡，剥离卵泡外层结缔组织。

2. 沿卵泡膜小心剪开卵泡，去除卵黄与卵母细胞，保留卵泡基膜层，预冷 PBS 反复冲洗。

3. 将基膜组织剪切成细小碎片，PBS 漂洗 3 次去除卵黄残留。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎片加入胶原酶消化液，37℃水浴消化 35min，间断吹打打散组织。

2. 培养基终止消化，筛网过滤得到单细胞悬液，离心收集细胞沉淀。

3. PBS 重悬离心洗涤一次，去除酶液杂质。

四、纯化与接种培养

1. 完全培养基重悬细胞接种培养瓶，常规 37℃5% CO₂培养。

2. 24h 换液清除未贴壁杂细胞，每 2~3 天更换培养基。

3. 细胞长满后胰酶消化传代，可通过差速贴壁去除卵泡上皮杂细胞。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.培养基中添加10-15%胎牛血清即可满足成纤维细胞生长需求，高血清浓度可加速细胞增殖。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。