产品名称 | 鸡骨骼肌细胞 | 组织来源 | 大腿骨骼肌组织 |
英文名称 | Chicken Skeletal Muscle Cells | 种属 | 三黄鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2729 |
方法简介 实验室分离的鸡骨骼肌细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡骨骼肌细胞经α-Sarcomeric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 鸡骨骼肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡骨骼肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SPF级鸡胚(E10-E12)，取腓肠肌/心肌等目标肌肉组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、胶原酶、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS、胰岛素
分离纯化步骤
取实验动物目标肌肉组织，用预冷PBS冲洗去除血液和结缔组织
剪碎组织后先经机械法分散，再加入0.25%胰蛋白酶37度消化15分钟
加入II型胶原酶继续消化30-40分钟，期间振荡2-3次
过滤后300g离心8分钟收集细胞沉淀
采用差速贴壁法或Percoll密度梯度离心纯化肌源性细胞
原代培养要点
骨骼肌细胞：使用DMEM+20%FBS培养基培养肌源性干细胞，换用2%FBS诱导分化
心肌细胞：使用M199+20%FBS培养基，37度、5% CO2培养，细胞呈节律性搏动
肌卫星细胞可在培养7-10天后融合形成多核肌管(Myotube)
心肌细胞培养需注意电刺激培养可促进成熟和同步搏动
常见问题优化
肌细胞融合率低：降低培养皿FBS浓度至2%可促进肌管形成
心肌细胞搏动不协调：使用电刺激培养装置(1Hz，2ms脉冲)可促进同步搏动
成纤维细胞污染：采用Pre-plating差速贴壁法2-3次可有效富集肌源性细胞
大鼠硫氧还蛋白(TXN)elisa试剂盒 | KLE人子宫内膜癌细胞 |
大鼠肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子(TWEAK；TNFSF12)elisa试剂盒 | 大鼠乳腺成纤维细胞 |
大鼠β3-微管蛋白(TUBB3)elisa试剂盒 | 大鼠肾上腺皮质细胞 |
大鼠甲状腺激素转运蛋白(TTR)elisa试剂盒 | MCF-7/DDP (人乳腺癌顺铂耐药性细胞) |
大鼠CD36分子(CD36)elisa试剂盒 | 小鼠黑色素瘤细胞转染OVA B16+OVA（种属鉴定） |
大鼠CD3分子(CD3)elisa试剂盒 | 人胰腺成纤维细胞 |
猪腺苷酸琥珀酸裂解酶（ADSL）elisa试剂盒 | 兔原代T淋巴细胞 |
RGC-5小鼠视网膜神经节细胞专用培养基 | FDXACB1基因过表达细胞株 |
HL-1小鼠心肌细胞专用培养基 | FMO4基因过表达细胞株 |
小鼠原代肺动脉内皮细胞专用培养基 | GDF11基因过表达细胞株 |
BJ细胞专用培养基 | CAPN5基因过表达细胞株 |
人原代骨骼肌微血管内皮细胞专用培养基 | COG3基因过表达细胞株 |
鸡骨骼肌细胞WPMY-1细胞专用培养基 | ASB2基因过表达细胞株 |
BV2细胞专用培养基 | GIPR基因过表达细胞株 |
复苏预处理：37℃水浴快速融化冻存管，75% 酒精管壁消毒，全程控制融化时长≤90s
细胞重悬：完全培养基稀释冻存液，低速离心去除 DMSO 沉淀，轻柔吹打制备单细胞悬液
铺板培养：接种于胶原包被培养瓶，放置 37℃、5% CO₂饱和湿度孵箱静置贴壁
换液纯化：培养 24h 弃上清，去除未贴壁杂细胞与死亡肌卫星细胞，补充新鲜分化培养基
诱导分化：待细胞融合至 75%，更换低血清分化液，持续诱导肌管融合 3-5 天
传代消化：0.25% 胰酶 - EDTA 室温消化 3min，终止消化后离心分瓶，控制细胞密度
冻存保种：对数生长期细胞配冻存液梯度降温，液氮长期保存，记录细胞分化状态
