鸡肺动脉内皮细胞

鸡肺动脉内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离来航鸡肺动脉内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：鸡肺动脉内皮细胞

英文名称： Chicken Pulmonary Artery Endothelial Cells

组织来源： 肺大动脉组织

默认种属 ：三黄鸡

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的鸡肺动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的鸡肺动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 鸡肺动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

鸡肺动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 试剂：M199 培养基、15% 鸡胚血清、双抗、0.1%Ⅰ 型胶原酶、肝素 PBS。

2. 耗材：血管结扎线、显微剪镊、培养瓶、离心管，选用成年肉鸡肺动脉。

3. 无菌环境取材，器械提前高压灭菌。

二、取材与预处理

1. 鸡处死后开胸，分离心肺组织，游离肺动脉主干及分支，剔除外周结缔组织。

2. 两端结扎血管一端，肝素 PBS 反复冲洗血管内腔，彻底冲净血液。

3. 外壁酒精消毒，沥干管内冲洗液备用。

三、细胞分离与消化

1. 血管内灌注胶原酶消化液，封口结扎，37℃水浴消化 18~22min。

2. 剪开管口收集消化液，培养基冲洗血管内壁，合并所有细胞悬液。

3. 离心收集细胞沉淀，PBS 洗涤去除消化酶。

四、纯化与接种培养

1. 内皮专用完全培养基重悬接种培养瓶，置于培养箱贴壁生长。

2. 24h 换液去除悬浮杂质细胞，后续隔日更换培养基。

3. vWF 因子染色鉴定内皮纯度，细胞汇合后低比例传代，避免内皮细胞间质转化。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。