产品名称 | 大鼠棕色前脂肪细胞 | 组织来源 | 肩胛背颈皮下脂肪 |
英文名称 | Rat Brown Preadipocytes | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3342 |
方法简介 实验室分离的大鼠棕色前脂肪细胞采用胶原酶消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠棕色前脂肪细胞经成脂诱导功能验证，诱导成脂后，经油红O定性检测阳性，成脂染色数占比>60%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠棕色前脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠棕色前脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取皮下脂肪或棕色脂肪组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS、IBMX、地塞米松、胰岛素
分离纯化步骤
取实验动物脂肪组织，剪碎后加入II型胶原酶(1mg/mL)37度振荡消化1-2小时
消化液经70um滤网过滤，100g离心10分钟收集沉渣(含前脂肪细胞和脂肪细胞)
去除上层脂肪层，将沉渣重悬于PBS中，再次离心纯化
沉淀细胞接种于培养皿中，贴壁细胞即为前脂肪细胞/脂肪间充质干细胞
原代培养要点
前脂肪细胞使用DMEM/F12+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养
细胞呈梭形贴壁生长，融合达80-90%时传代
诱导分化：换用分化培养基(DMEM+10%FBS+0.5mM IBMX+1uM地塞米松+10ug/mL胰岛素)诱导48-72小时后换维持培养基
脂肪细胞培养7-14天后可观察到明显脂滴积累，Oil Red O染色阳性
常见问题优化
前脂肪细胞得率低：延长胶原酶消化时间至2小时，适当提高酶浓度
分化效率低：确保诱导培养基中各组分新鲜配制，IBMX需现用现配
细胞老化：控制传代次数在5代以内，早期代次分化潜能更佳
大鼠磷酸化信号转导和转录激活因子3(Tyr705)elisa试剂盒 | KB人口腔表皮癌细胞 |
大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)elisa试剂盒 | 大鼠子宫内膜上皮细胞 |
大鼠血栓素B2(TXB2)elisa试剂盒 | 大鼠垂体细胞 |
大鼠促吞噬肽(Tuftsin)elisa试剂盒 | Farage (人B淋巴瘤细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠CD25分子(CD25)elisa试剂盒 | 小鼠胚胎成纤维细胞3T3-Swiss albino（种属鉴定） |
大鼠CD31抗体(CD31-Ab)elisa试剂盒 | 人甲状旁腺细胞 |
猪腺苷脱氨酶1（ADA-1）elisa试剂盒 | 大鼠原代脑血管周细胞 |
RAW 264.7+GFP小鼠单核巨噬白血病+GFP细胞专用培养基 | ARHGAP10基因过表达细胞株 |
HEPA1-6小鼠肝癌细胞专用培养基 | F2RL3基因过表达细胞株 |
人原代脾脏单核细胞专用培养基 | DPYS基因过表达细胞株 |
BFTC-905细胞专用培养基 | PRAM1基因过表达细胞株 |
人原代骨髓肥大细胞专用培养基 | BRF1基因过表达细胞株 |
大鼠棕色前脂肪细胞Walker/LLC-WRC256细胞专用培养基 | FBXW2基因过表达细胞株 |
BT-474细胞专用培养基 | B3GNT3基因过表达细胞株 |
无菌分离大鼠肩胛间棕色脂肪组织，剔除周围白色脂肪与血管结缔组织。
组织剪碎后加入 0.15%Ⅰ 型胶原酶，37℃水浴消化 55min，解离前体细胞。
终止消化后过筛，离心去除成熟漂浮棕色脂肪细胞，保留下层前脂肪细胞沉淀。
用前脂肪细胞增殖培养基重悬接种，培养 24h 后换液清除血细胞杂质。
持续扩增培养，细胞呈成纤维样梭形，尚未出现大量脂滴。
待细胞汇合可启动诱导分化方案，检验其向成熟棕色脂肪分化潜能。
检测 UCP1 基础表达水平，确认棕色前脂肪细胞特性，区别于白色前脂肪细胞。
