产品名称 | 大鼠子宫颈上皮细胞 | 组织来源 | 子宫组织 |
英文名称 | Rat Cervical Epithelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2883 |
方法简介 实验室分离的大鼠子宫颈上皮细胞采用胶原酶消化法，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠子宫颈上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠子宫颈上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠子宫颈上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠尿酸盐转运子(UAT)elisa试剂盒 | K562/ADR 人K562耐阿霉素细胞株 |
大鼠胸腺素β4(Tβ4)elisa试剂盒 | 大鼠卵巢颗粒细胞 |
大鼠酪氨酸酶(TyR)elisa试剂盒 | 大鼠甲状腺上皮细胞 |
大鼠硫氧还蛋白(TXN)elisa试剂盒 | U266 (人多发性骨髓瘤细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠CD20分子(CD20)elisa试剂盒 | 人胃癌顺铂耐药株 AGS/DDP（STR鉴定正确） |
大鼠CD22分子(CD22)elisa试剂盒 | 小鼠骨膜干细胞 |
猪心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ）elisa试剂盒 | 人原代喉黏膜上皮细胞 |
RAG小鼠肾腺癌细胞专用培养基 | TARS3基因过表达细胞株 |
H22小鼠肝癌细胞专用培养基 | GPR139基因过表达细胞株 |
兔原代脾基质细胞专用培养基 | ZNF229基因过表达细胞株 |
bEnd.3+RFP细胞专用培养基 | CES4A基因过表达细胞株 |
人原代关节滑膜成纤维细胞专用培养基 | CAPN3基因过表达细胞株 |
大鼠子宫颈上皮细胞VEROE6细胞专用培养基 | FAS基因过表达细胞株 |
BJ细胞专用培养基 | GLIPR1L2基因过表达细胞株 |
解剖分离大鼠宫颈组织，纵向剪开宫颈管，用 PBS 冲洗清除宫颈黏液与分泌物。
剪切宫颈黏膜层组织，加入 0.25% 胰酶 - EDTA 4℃冷消化过夜松解上皮细胞。
次日 37℃短暂孵育 15min，轻柔吹打黏膜面，使上皮细胞脱落至消化液。
筛网过滤后离心收集细胞，使用上皮细胞专用培养基重悬接种于胶原包被培养板。
培养 48h 首次换液，去除成纤维细胞杂质，上皮细胞呈铺路石样聚集生长。
后续隔天换液，抑制间质细胞增殖，维持上皮细胞单层结构。
角蛋白 CK18 免疫荧光染色阳性，验证子宫颈上皮细胞纯度合格。
