大鼠子宫成纤维细胞

大鼠子宫成纤维细胞

运用胶原酶 I 消化法从Sprague-Dawley大鼠子宫成纤维细胞组织中提取间充质成分，经密度梯度离心去除血液细胞后，接种于胶原 IV 包被的培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术分析 CD90+、CD44+、CD105+ 阳性率及 CD34-、CD45- 阴性率，免疫荧光染色显示 vimentin 强阳性、角蛋白阴性，并经成纤维细胞集落形成实验验证增殖能力。

产品名称：大鼠子宫成纤维细胞

英文名称： Rat Uterine Fibroblasts

组织来源： 子宫组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠子宫成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠子宫成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠子宫成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠子宫成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌摘取大鼠子宫组织，剔除子宫内膜与肌层，剥离子宫间质结缔组织部分。

将结缔组织剪碎，加入 0.1%Ⅰ 型胶原酶 37℃消化 50min，充分解离间质成纤维细胞。

培养基终止消化，过滤组织残渣，1250rpm 离心 9min 收集细胞沉淀。

用 DMEM 完全培养基重悬细胞，接种培养，利用成纤维细胞贴壁速度快的特性初步纯化。

培养 24h 后换液去除未贴壁上皮细胞杂质，继续扩增培养。

细胞长至汇合度 80% 进行传代，控制传代次数防止细胞老化。

波形蛋白 Vimentin 染色阳性、角蛋白阴性，完成子宫成纤维细胞鉴定。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。