大鼠主动脉内皮细胞

大鼠主动脉内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离Sprague-Dawley大鼠主动脉内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：大鼠主动脉内皮细胞

英文名称： Rat Aortic Endothelial Cells

组织来源： 胸主动脉组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠主动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠主动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠主动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠主动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌取出大鼠胸主动脉，置于预冷 PBS 中，剥离血管外膜多余结缔组织，保留完整血管段。

用无菌棉线结扎血管远端，从近端灌入 0.1% 胶原酶 Ⅰ 溶液，充盈血管腔后两端结扎封闭。

将充盈血管置于 37℃孵箱孵育 25min，轻柔揉搓血管外壁，使内皮细胞脱落至管内消化液。

剪开血管收集管内液体，经 70μm 筛过滤，1200rpm 离心 7min 获得内皮细胞沉淀。

用内皮细胞专用 ECM 培养基重悬细胞，接种于提前包被明胶的培养皿促进贴壁。

培养 24h 换液去除污染的平滑肌细胞，每日观察鹅卵石样内皮细胞单层形态。

采用 CD31 免疫荧光染色鉴定内皮纯度，纯度达标后用于血管功能相关实验。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.长期培养中需定期检测细胞标志物表达，确保细胞身份和纯度不受影响。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。