产品名称 | 大鼠终板软骨细胞 | 组织来源 | 椎间盘组织 |
英文名称 | Rat Endplate Chondrocytes | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3152 |
方法简介 实验室分离的大鼠终板软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠终板软骨细胞，P0代经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠终板软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠终板软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取胫骨/股骨/关节软骨等组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS
分离纯化步骤
取实验动物目标骨组织或软骨组织，仔细去除软组织包膜
骨组织：剪碎后用0.25%胰蛋白酶消化20分钟，再加入II型胶原酶消化60-90分钟
软骨组织：剪碎后直接用II型胶原酶37度振荡消化4-6小时
消化液经70um和40um滤网过滤，400g离心10分钟收集细胞
原代培养要点
成骨细胞：使用DMEM+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养，细胞呈多角形贴壁
软骨细胞：使用DMEM/F12+10%FBS+10ng/mL TGF-beta3培养基，可悬浮或三维培养
成骨细胞培养14-21天后可检测到ALP活性和矿化结节形成
软骨细胞传代后易去分化，建议采用低传代次数(2-3代)或三维球状培养维持表型
常见问题优化
骨细胞得率低：延长胶原酶消化时间至90分钟，或采用两次消化法
软骨细胞去分化：采用高浓度悬浮培养(1x10^5 cells/mL)维持软骨表型
成骨细胞污染：采用差速贴壁法或免疫磁珠分选提高成骨细胞纯度
大鼠尿皮质素2(UCN2)elisa试剂盒 | JAR人胎盘绒毛癌细胞 |
大鼠羧化基质谷氨酸蛋白(ucMGP)elisa试剂盒 | 大鼠肾上腺髓质细胞 |
大鼠泛素化蛋白(Ubiquitination)elisa试剂盒 | 大鼠肾周细胞 |
大鼠尿酸盐转运子(UAT)elisa试剂盒 | Hs 578Bst (人正常乳腺细胞) |
大鼠CD146分子(CD146)elisa试剂盒 | 人胰腺癌细胞荧光素酶AsPC-1+LUC(STR鉴定正确) |
大鼠CD163分子(CD163)elisa试剂盒 | 小鼠肺动脉成纤维细胞 |
猪心型脂肪酸结合蛋白（h-FABP）elisa试剂盒 | 兔原代脉络膜微血管内皮细胞 |
P815小鼠肥大瘤细胞专用培养基 | PAPOLG基因过表达细胞株 |
GC-2 SPd(ts)小鼠精母系细胞专用培养基 | BMP6基因过表达细胞株 |
小鼠原代甲状腺上皮细胞专用培养基 | FOXN2基因过表达细胞株 |
BALB/3T3cloneA31细胞专用培养基 | ALG6基因过表达细胞株 |
人原代横纹肌细胞专用培养基 | LHCGR基因过表达细胞株 |
大鼠终板软骨细胞UACC-812细胞专用培养基 | FDXACB1基因过表达细胞株 |
bEnd.3+RFP细胞专用培养基 | ZXDB基因过表达细胞株 |
摘取大鼠腰椎椎体上下软骨终板，小心分离终板与椎间盘、骨组织，PBS 多次冲洗。
去除终板表面结缔组织，剪碎软骨终板至细小颗粒，先用 0.25% 胰酶预消化 20min 弃上清。
加入 0.2%Ⅱ 型胶原酶，37℃水浴持续消化 90min，间断吹打促进软骨细胞释放。
过滤消化液，1400rpm 离心 10min 收集细胞，用 DMEM 高糖完全培养基重悬。
接种细胞于培养瓶，置于 5% CO₂培养箱，培养 48h 首次换液去除未贴壁杂质。
培养期间避免细胞过度传代，防止软骨细胞发生去分化、丧失 Ⅱ 型胶原分泌能力。
通过 Ⅱ 型胶原免疫荧光染色鉴定终板软骨细胞功能状态，合格后开展后续培养。
