产品名称 | 大鼠直肠平滑肌细胞 | 组织来源 | 直肠组织 |
英文名称 | Rat Rectal Smooth Muscle Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2850 |
方法简介 实验室分离的大鼠直肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠直肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠直肠平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠直肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，组织取材需保持血管/器官完整性
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、平滑肌细胞专用培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织(血管/器官平滑肌层)，用预冷PBS反复冲洗去除血液
仔细分离去除外膜和黏膜层，仅保留平滑肌层组织，剪碎至1-2mm3
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合液，37度消化40-60分钟，期间振荡2-3次
消化完成后过滤(70um+40um)，300g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞悬液接种于培养皿中，采用差速贴壁法24小时后换液去除非贴壁细胞
原代培养要点
平滑肌细胞贴壁能力较强，接种后24-48小时可见贴壁细胞呈梭形生长
使用含20%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时进行传代
平滑肌细胞传代时使用0.25%胰蛋白酶消化5-10分钟，离心收集后重新接种
常见问题优化
细胞纯度不高：可采用药物筛选法(5-氟尿嘧啶20uM处理48小时去除非平滑肌细胞)
平滑肌细胞表型转换：控制传代次数在5代以内，培养基中保持适当FBS浓度(10-20%)
细胞生长缓慢：添加10ng/mL PDGF-BB可促进平滑肌细胞增殖
大鼠尿皮质素3(UCN3)elisa试剂盒 | J82人膀胱移行细胞癌 |
大鼠尿皮质素(UCN)elisa试剂盒 | 大鼠肾上腺皮质细胞 |
大鼠泛素C末端水解酶L1(Uch-L1)elisa试剂盒 | 大鼠前列腺成纤维细胞 |
大鼠泛素(Ub)elisa试剂盒 | Acc-3 (人涎腺腺样囊性癌细胞) |
大鼠CD133分子(CD133)elisa试剂盒 | 人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株HCT-15+5FU(STR鉴定正确) |
大鼠CD14分子(CD14)elisa试剂盒 | 兔巩膜成纤维细胞 |
猪新城疫抗体（NDV-Ab）elisa试剂盒 | 兔原代脐带间充质干细胞 |
P388D1小鼠淋巴样瘤细胞专用培养基 | ZBTB39基因过表达细胞株 |
GC-1 spg小鼠精原系细胞专用培养基 | APEX2基因过表达细胞株 |
兔原代气管上皮细胞专用培养基 | ENTPD8基因过表达细胞株 |
BAF3细胞专用培养基 | GRHL1基因过表达细胞株 |
人原代喉黏膜上皮细胞专用培养基 | GPR162基因过表达细胞株 |
大鼠直肠平滑肌细胞U-937细胞专用培养基 | GLIPR1L2基因过表达细胞株 |
Bel-7405细胞专用培养基 | GBP2基因过表达细胞株 |
分离大鼠远端直肠肠段，沿肠壁纵向剪开，用无菌棉签机械刮除肠黏膜上皮层。
剥离黏膜下层，保留肌层组织，PBS 冲洗干净肠内容物与黏液，剔除浆膜层。
将平滑肌肌层剪碎，加入 0.1%Ⅱ 型胶原酶 + 0.05% 胰酶混合消化液，37℃消化 50min。
终止消化后过 100μm 筛网，1300rpm 离心 9min 收集细胞沉淀。
采用组织块贴壁法，将小块肌组织均匀铺于培养瓶底，倒置培养 4h 后缓慢加入培养基。
第 5 天观察梭形平滑肌细胞从组织块爬出，每 2 天换液，抑制成纤维细胞过度生长。
细胞传代后做 α-SMA 免疫荧光染色鉴定，阳性细胞占比达标即可用于实验。
