产品名称 | 大鼠真皮成纤维细胞 | 组织来源 | 背腹部皮肤组织 |
英文名称 | Rat Dermal Fibroblasts | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2982 |
方法简介 实验室分离的大鼠真皮成纤维细胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠真皮成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠真皮成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠真皮成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠脲酶(UE)elisa试剂盒 | HUVEC人脐静脉内皮细胞（原代细胞永生化） |
大鼠泛素交叉反应蛋白(UCRP)elisa试剂盒 | 大鼠甲状腺上皮细胞 |
大鼠解偶联蛋白1(UCP1)elisa试剂盒 | 大鼠肾小球内皮细胞 |
大鼠尿皮质素3(UCN3)elisa试剂盒 | SNU-1 (人胃癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠carabin蛋白(carabin)elisa试剂盒 | 人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞U251MG+TMZ+luc(STR鉴定正确) |
大鼠CCAAT增强子结合蛋白1(CEBP-1)elisa试剂盒 | 人肝门静脉成纤维细胞 |
猪雄烯二酮（ASD）elisa试剂盒 | 大鼠原代附睾上皮细胞 |
NIH/3T3小鼠胚胎细胞专用培养基 | ZNF507基因过表达细胞株 |
E14小鼠胚胎干细胞专用培养基 | CAPN5基因过表达细胞株 |
大鼠原代输卵管上皮细胞专用培养基 | C4orf17基因过表达细胞株 |
AtT-20细胞专用培养基 | FBXW2基因过表达细胞株 |
人原代肌源干细胞专用培养基 | GPR37基因过表达细胞株 |
大鼠真皮成纤维细胞U14细胞专用培养基 | ZXDB基因过表达细胞株 |
BAF3细胞专用培养基 | SEMA3E基因过表达细胞株 |
取大鼠背部皮肤，剔除皮下脂肪，用碘伏与 PBS 反复消毒冲洗表皮污染物。
用 dispase 酶 4℃过夜消化分离表皮与真皮，仅收集真皮层组织剪碎。
胶原酶消化真皮组织释放成纤维细胞，离心后接种普通成纤维细胞培养基即可培养。
24h 即可完成贴壁，细胞呈典型梭形漩涡生长，增殖速度较快。
每 2-3 天换液，汇合 90% 进行常规传代，传代稳定性强、可扩增多代。
可开展皮肤衰老、创面愈合、胶原分泌相关干预实验，检测 MMP 蛋白表达。
常规冻存即可，复苏存活率高，是皮肤相关研究常用基础细胞。
