产品名称 | 大鼠阴道上皮细胞 | 组织来源 | 阴道组织 |
英文名称 | Rat Vaginal Epithelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3283 |
方法简介 实验室分离的大鼠阴道上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠阴道上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠阴道上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠阴道上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠超敏游离雌三醇(uE3)elisa试剂盒 | HUTU-80人十二脂肠腺癌 |
大鼠尿I型胶原C-末端肽交联(U-CTX)elisa试剂盒 | 大鼠膀胱间质细胞 |
大鼠解偶联蛋白4(UCP4)elisa试剂盒 | 大鼠肾小球系膜细胞 |
大鼠羧化不全骨钙素(ucOC)elisa试剂盒 | 293T/17 (人胚肾细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠cAMP反应元件结合蛋白(CREB)elisa试剂盒 | 大鼠脊髓前角运动神经元瘤细胞 VSC4.1（种属鉴定） |
大鼠CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)elisa试剂盒 | 大鼠脊髓神经元细胞 |
猪雄烯酮（ADT）elisa试剂盒 | 兔原代淋巴管内皮细胞 |
NIH/3T3小鼠胚胎细胞专用培养基 | GDF9基因过表达细胞株 |
E14小鼠胚胎干细胞专用培养基 | CAGE1基因过表达细胞株 |
大鼠原代肠（结肠）间质细胞专用培养基 | SATB2基因过表达细胞株 |
ATDC5细胞专用培养基 | LHCGR基因过表达细胞株 |
人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞专用培养基 | FAM227A基因过表达细胞株 |
大鼠阴道上皮细胞U-138MG细胞专用培养基 | GBP2基因过表达细胞株 |
B95-8细胞专用培养基 | ZNF665基因过表达细胞株 |
剥离大鼠阴道黏膜层，PBS 冲洗去除分泌物，将黏膜上皮内侧朝外进行酶消化。
冷胰酶消化过夜，轻柔刮取表层阴道上皮，过滤获得上皮单细胞悬液。
接种胶原蛋白包被培养皿，使用生殖道上皮专用培养基添加雌激素维持细胞特性。
24h 观察贴壁情况，细胞呈多边形，形成紧密连接上皮单层结构。
隔天换液，及时清除悬浮凋亡细胞，防止代谢酸化损伤单层屏障。
体外传代次数不宜超过 3 代，多次传代会丢失阴道上皮分化特征。
可构建阴道黏膜屏障模型，检测病原体侵袭、局部免疫应答相关指标。
