大鼠阴道壁成纤维细胞

大鼠阴道壁成纤维细胞

从Sprague-Dawley大鼠阴道壁成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：大鼠阴道壁成纤维细胞

英文名称： Rat Vaginal Wall Fibroblasts

组织来源： 阴道组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠阴道壁成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠阴道壁成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠阴道壁成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠阴道壁成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌切取大鼠阴道壁结缔组织，剔除黏膜上皮层与外侧肌肉层，仅保留中间纤维结缔组织。

组织剪碎后组织块贴壁培养，滴加少量培养基润湿，倒置培养促进细胞爬出。

培养第 5 天可见梭形成纤维细胞从组织边缘爬出，半量换液去除坏死组织。

细胞生长至汇合 85% 进行胰酶消化传代，纯化去除少量上皮杂细胞。

培养基可添加雌激素，模拟体内激素微环境，观察成纤维细胞胶原合成变化。

可开展盆底松弛、阴道壁纤维化相关体外实验，检测 Ⅰ、Ⅲ 型胶原表达。

常规程序冻存，复苏后细胞增殖稳定，适合多批次药物干预对比实验。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠，年龄和体重需符合实验标准要求。 传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。