大鼠羊膜上皮细胞

大鼠羊膜上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对Sprague-Dawley大鼠的羊膜上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征

产品名称：大鼠羊膜上皮细胞

英文名称： Rat Amniotic Epithelial Cells

组织来源： 胎盘组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠羊膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠羊膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠羊膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠羊膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

分离完整羊膜组织，上皮面朝上平铺于无菌培养皿，PBS 多次冲洗清除表面黏液成分。

使用 0.25% 胰酶 4℃冷消化过夜，轻柔刮取羊膜表层上皮细胞，避免刮取深层间质组织造成杂细胞污染。

过滤细胞悬液离心，用角质细胞培养基重悬细胞沉淀，添加氢化可的松促进上皮存活。

接种在层粘连蛋白包被培养板，上皮细胞 24h 内完成贴壁，形态呈规则多边形铺路石样。

隔天换液，及时清除漂浮凋亡细胞，严禁培养基长时间蓄积代谢废物。

传代时消化时间控制极短，羊膜上皮体外增殖代数有限，不建议多次传代扩增。

收获细胞可构建上皮屏障模型，样本可做免疫荧光染色检测 CK19 上皮特异性标志物。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.部分细胞类型需要特定的细胞外基质包被才能正常贴壁和发挥功能，需提前优化条件。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。