产品名称 | 大鼠羊膜胚胎细胞 | 组织来源 | 羊膜组织 |
英文名称 | Rat Amniotic Embryonic Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3359 |
方法简介 实验室分离的大鼠羊膜胚胎细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠羊膜胚胎细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠羊膜胚胎细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠羊膜胚胎细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A8(UGT1A8)elisa试剂盒 | HT-29 (HT29)人结肠癌细胞 |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A3(UGT1A3)elisa试剂盒 | 大鼠前列腺上皮细胞 |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A(UGT1A)elisa试剂盒 | 大鼠肝卵圆细胞 |
大鼠低糖基化IgA1(UGIGA1)elisa试剂盒 | TE-10 (人食管癌细胞) |
大鼠C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)elisa试剂盒 | 敲除P53基因细胞株HCT116+P53 |
大鼠C4结合蛋白(C4BP)elisa试剂盒 | 牛结直肠黏膜上皮细胞 |
猪血管内皮生长因子A（VEGFA）elisa试剂盒 | 人原代主动脉外膜成纤维细胞 |
MPC-5小鼠肾足细胞专用培养基 | ADAM29基因过表达细胞株 |
SW48人结肠腺癌细胞专用培养基 | COG3基因过表达细胞株 |
大鼠原代前列腺上皮细胞专用培养基 | ASB2基因过表达细胞株 |
AN3CA细胞专用培养基 | GPR37基因过表达细胞株 |
人原代角膜基质细胞专用培养基 | TARS3基因过表达细胞株 |
大鼠羊膜胚胎细胞TOV-112D细胞专用培养基 | ZNF665基因过表达细胞株 |
AT-3细胞专用培养基 | CELF3基因过表达细胞株 |
分离大鼠羊膜连带胚胎早期组织，全程冰上操作降低细胞代谢损耗，预冷 PBS 冲洗组织去除血液。
采用胰酶与胶原酶混合消化液低温分步消化，先短时间消化松散细胞，收集上清再二次消化剩余组织。
离心收集所有细胞，使用胚胎干细胞专用高糖培养基重悬，添加 LIF 因子抑制细胞自发分化。
接种于饲养层细胞培养皿内，培养箱维持低氧 5% O₂环境，更贴合胚胎体内微环境。
每日镜检观察胚胎细胞克隆形态，若克隆出现扁平分化迹象及时传代分克隆。
采用机械挑取方式挑取未分化致密克隆，剔除已经分化的松散细胞群落。
冻存需使用胚胎级冻存液，严格程序降温，复苏后及时检测多能性基因 Oct4 表达水平。
