产品名称 | 大鼠羊膜间质细胞 | 组织来源 | 胎盘组织 |
英文名称 | Rat Amniotic Mesenchymal Stromal Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3336 |
方法简介 实验室分离的大鼠羊膜间质细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠羊膜间质细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠羊膜间质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠羊膜间质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A9(UGT1A9)elisa试剂盒 | HT-1376人膀胱癌细胞 |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A4(UGT1A4)elisa试剂盒 | 大鼠膀胱基质成纤维细胞 |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A1(UGT1A1)elisa试剂盒 | 大鼠肠间质细胞 |
大鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)elisa试剂盒 | T/G HA-VSMC (人血管平滑肌细胞) |
大鼠C1q肿瘤坏死因子相关蛋白5(CTRP5)elisa试剂盒 | 人胃癌细胞 KATO III(STR鉴定正确) |
大鼠C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)elisa试剂盒 | 人鼻粘膜上皮细胞 |
猪血管内皮生长因子B（VEGFB）elisa试剂盒 | 兔原代气管平滑肌细胞 |
MPC-5小鼠肾足细胞专用培养基 | D2HGDH基因过表达细胞株 |
SW48人结肠腺癌细胞专用培养基 | C4orf17基因过表达细胞株 |
兔原代脊髓微血管内皮细胞专用培养基 | COLQ基因过表达细胞株 |
AMO-1细胞专用培养基 | FAM227A基因过表达细胞株 |
人原代角膜内皮细胞专用培养基 | ZXDB基因过表达细胞株 |
大鼠羊膜间质细胞Toledo细胞专用培养基 | ACVR2A基因过表达细胞株 |
ASPC-1/GEM细胞专用培养基 | STRN基因过表达细胞株 |
无菌取大鼠胎膜羊膜层，机械剥离去除表层上皮，留存下层疏松间质组织，PBS 反复冲洗去除血迹与胎粪杂质。
将羊膜间质组织剪碎，加入 0.1%Ⅱ 型胶原酶 37℃恒温振荡消化 60min，间断吹打打散细胞团块。
消化结束后过 70μm 细胞筛过滤，滤液离心获取单细胞沉淀，用间充质干细胞培养基重悬。
接种至培养瓶，利用间质细胞快速贴壁特性，1h 差速贴壁去除未贴壁上皮细胞，完成初步纯化。
每 3 天更换培养基，观察细胞呈长梭形漩涡状生长，定期检测 CD29、CD90 干细胞标志物表达。
细胞汇合 90% 进行传代，控制传代次数不超过 6 代，避免干细胞干性大幅丢失。
可诱导成骨、成脂分化，冻存时使用无血清干细胞冻存液，复苏后仍可维持多向分化潜能。
