大鼠牙周膜成纤维细胞

大鼠牙周膜成纤维细胞

运用胶原酶 I 消化法从Sprague-Dawley大鼠牙周膜成纤维细胞组织中提取间充质成分，经密度梯度离心去除血液细胞后，接种于胶原 IV 包被的培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术分析 CD90+、CD44+、CD105+ 阳性率及 CD34-、CD45- 阴性率，免疫荧光染色显示 vimentin 强阳性、角蛋白阴性，并经成纤维细胞集落形成实验验证增殖能力。

产品名称：大鼠牙周膜成纤维细胞

英文名称： Rat Periodontal Ligament Fibroblasts

组织来源： 牙周膜组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠牙周膜成纤维细胞采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠牙周膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠牙周膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠牙周膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

若为原代分离样本，先无菌剥离大鼠牙根表面牙周膜组织，剪碎成 1mm³ 细小组织块；若为冻存细胞则快速水浴复苏。

组织块采用贴壁法铺于培养瓶底，间距保持 3mm，滴加少量培养基湿润组织，倒置培养瓶静置 4h 让组织粘附。

缓慢补加足量牙周膜专用培养基，放入培养箱，7 天内尽量减少开箱频次，防止温度波动影响细胞爬出。

第 7 天镜检，观察梭形成纤维细胞从组织块周边爬出，半量更换培养基，去除漂浮坏死组织碎屑。

细胞向外生长汇合至 80%，使用低浓度胰酶消化，牙周膜细胞韧性较强，可适度延长 30s 消化时长。

首次传代去除残留组织块，纯化牙周膜成纤维细胞，剔除牙根残留的牙骨质杂质细胞。

传代后可开展力学牵拉、炎症造模实验，冻存时添加抗纤维化保护剂，降低后续体外纤维化异常增殖概率。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。