产品名称 | 大鼠牙龈上皮细胞 | 组织来源 | 牙龈组织 |
英文名称 | Rat Gingival Epithelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3262 |
方法简介 实验室分离的大鼠牙龈上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠牙龈上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠牙龈上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠牙龈上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶2家族多肽B(UGT2B)elisa试剂盒 | HSF(SV40)人真皮成纤维细胞（原代细胞永生化） |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A8(UGT1A8)elisa试剂盒 | 大鼠膀胱上皮细胞 |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A4(UGT1A4)elisa试剂盒 | 大鼠肝间质细胞 |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A(UGT1A)elisa试剂盒 | SW 780 [SW-780, SW780] (人膀胱移行细胞癌) (STR鉴定正确) |
大鼠C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)elisa试剂盒 | 人肺腺癌细胞NCI-H1975(STR鉴定正确) |
大鼠C1q肿瘤坏死因子相关蛋白5(CTRP5)elisa试剂盒 | 人胆囊微血管内皮细胞 |
猪血管内皮细胞粘附分子（VCAM）elisa试剂盒 | 兔原代海马神经干细胞 |
MOVAS小鼠主动脉血管平滑肌细胞专用培养基 | DFFB基因过表达细胞株 |
SW1990人胰腺癌细胞专用培养基 | ATOH1基因过表达细胞株 |
猪原代骨骼肌细胞专用培养基 | CDK5R2基因过表达细胞株 |
AMC-HN-8细胞专用培养基 | GLIPR1L2基因过表达细胞株 |
人原代角质形成细胞专用培养基 | FAM187B基因过表达细胞株 |
大鼠牙龈上皮细胞TMD8细胞专用培养基 | DMRT3基因过表达细胞株 |
ASMC细胞专用培养基 | GCNA基因过表达细胞株 |
提前将上皮细胞专用培养基、PBS、胰酶 - EDTA 放置水浴锅预热至 37℃，紫外消毒超净工作台 30min 备用。
复苏冻存管细胞，融化后离心去除冻存保护剂，沉淀使用添加上皮生长因子的专用培养基重悬，不可使用普通成纤维培养基。
接种于预先包被胶原蛋白 I 的培养皿，上皮细胞贴壁依赖基质包被，接种后置于培养箱静置培养。
培养 20h 后首次换液，仔细吸除悬浮成纤维杂细胞，仅保留已贴壁的多边形上皮细胞群落。
每间隔 48h 更换一次培养基，密切观察上皮鹅卵石样形态，一旦出现梭形杂细胞及时用差速贴壁法纯化。
细胞汇合至 75% 开展传代，上皮细胞消化时间严格控制在 1min 内，过度消化会直接导致细胞凋亡。
收获细胞可用于角质化诱导实验，短期实验 4℃保存细胞悬液不超过 4h，长期样本使用上皮细胞专用冻存液冻存。
