大鼠胸腺上皮细胞

大鼠胸腺上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对Sprague-Dawley大鼠的胸腺上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征

产品名称：大鼠胸腺上皮细胞

英文名称： Rat Thymic Epithelial Cells

组织来源： 胸腺组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠胸腺上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠胸腺上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠胸腺上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠胸腺上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

解剖取出大鼠胸腺，分离胸腺皮质与髓质组织块，剔除淋巴组织。

采用胰酶与胶原酶联合分步消化，解离胸腺上皮细胞。

利用上皮细胞选择性贴壁特性，培养过程逐步去除悬浮淋巴细胞。

上皮细胞专用培养基添加表皮生长因子，促进上皮细胞增殖。

培养 5 天后首次传代，镜下观察细胞呈多边形铺路石形态。

CK19 免疫染色鉴定胸腺上皮细胞纯度。

体外共培养胸腺淋巴细胞，探究胸腺微环境对 T 细胞发育影响。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用0.01mg/ml纤连蛋白和0.1mg/ml多聚赖氨酸双重包被，神经元贴壁率和轴突延伸长度均有显著提升。

3.该细胞属于终末分化细胞，体外完全不增殖，全程禁止传代操作，所有功能实验必须在分离后7天内完成，避免神经元自发凋亡。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.换液操作需极其轻柔，使用预温的培养基沿培养壁缓慢加入，避免液流冲击导致贴壁不牢的神经元脱落。