产品名称 | 大鼠胸腺淋巴细胞 | 组织来源 | 胸腺组织 |
英文名称 | Rat Thymic Lymphocytes | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3128 |
方法简介 实验室分离的大鼠胸腺淋巴细胞采用机械研磨法结合密度梯度离心法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠胸腺淋巴细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠胸腺淋巴细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠胸腺淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠泛醌氧化还原酶(UQO)elisa试剂盒 | beas-2b人支气管上皮细胞 |
大鼠非羧化骨钙素(uOC)elisa试剂盒 | 人口腔黏膜上皮细胞 |
大鼠N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(UNAG)elisa试剂盒 | 人骨髓巨噬细胞 |
大鼠超敏胰岛素(U-INS)elisa试剂盒 | Ishikawa (人子宫内膜癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠B-细胞激活因子受体(BAFFR)elisa试剂盒 | 皮肤恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-5(STR鉴定正确) |
大鼠B细胞淋巴瘤-X(Bcl-X)elisa试剂盒 | 人小气道上皮细胞 |
猪血清淀粉样蛋白A1（SAA1）elisa试剂盒 | 小鼠原代肠肌成纤维细胞 |
MEF小鼠胚胎成纤维细胞专用培养基 | PADI6基因过表达细胞株 |
SU-DHL-4人B淋巴瘤 细胞专用培养基 | FBXW2基因过表达细胞株 |
兔原代外根鞘细胞专用培养基 | FAM227A基因过表达细胞株 |
A673细胞专用培养基 | AKAP8基因过表达细胞株 |
人原代颈动脉平滑肌细胞专用培养基 | CTIF基因过表达细胞株 |
大鼠胸腺淋巴细胞TC-1细胞专用培养基 | JAKMIP2基因过表达细胞株 |
AIM-V细胞培养基 | ACTR3B基因过表达细胞株 |
无菌摘取大鼠胸腺组织，置于预冷无菌培养皿中，剔除周边脂肪组织。
将胸腺放置于细胞筛网内，使用玻璃研磨棒轻柔研磨挤压组织。
PBS 持续冲洗筛网，使淋巴细胞充分透过筛网流入离心管。
加入淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，分离纯化胸腺单个核淋巴细胞。
吸取中间白膜层细胞，洗涤 2 次去除分离液残留杂质。
用 RPMI1640 完全培养基重悬细胞，可加入 ConA 刺激淋巴细胞活化。
流式检测 CD4/CD8 亚群比例，开展胸腺免疫发育相关功能实验。
