大鼠心脏微血管内皮细胞

大鼠心脏微血管内皮细胞

从Sprague-Dawley大鼠心脏微血管内皮细胞组织标本经胶原酶-弹性蛋白酶联合消化获取单细胞悬液，通过 Percoll 密度梯度离心纯化内皮细胞组分，接种于纤维连接蛋白预包被的培养皿中，使用内皮基础培养基 supplemented with 多种生长因子（VEGF、FGF-2、IGF-1 及 Ascorbic acid）维持培养；通过免疫荧光染色显示 CD31 膜染色阳性、vWF 胞质颗粒状表达，并结合乙酰化 LDL 荧光摄取实验和内皮管腔形成 assay 综合鉴定。

产品名称：大鼠心脏微血管内皮细胞

英文名称： Rat Cardiac Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 心脏心室组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠心脏微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠心脏微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠心脏微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠心脏微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

分离大鼠心室心肌微小血管网，剔除粗大冠脉血管，预冷 PBS 反复漂洗。

将微血管组织剪碎，胶原酶 Ⅰ37℃消化 25min，解离微血管内皮细胞。

经密度梯度离心纯化内皮细胞，去除心肌细胞、周细胞等杂质。

接种于明胶包被培养皿，使用内皮细胞专用培养基添加生长因子培养。

培养 48h 后换液，清除未贴壁细胞，观察细胞鹅卵石样形态。

CD31 免疫荧光染色鉴定内皮纯度，控制传代次数≤5 代。

构建糖氧剥夺模型，探究心脏微血管内皮屏障损伤机制。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠，年龄和体重需符合实验标准要求。 换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。