产品名称 | 大鼠心脏干细胞 | 组织来源 | 心脏心室组织 |
英文名称 | Rat Cardiac Stem Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3251 |
方法简介 实验室分离的大鼠心脏干细胞采用机械剪碎组织、胶原酶分次消化法结合差速贴壁、心脏干细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠心脏干细胞经c-kit免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 大鼠心脏干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 长梭形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠心脏干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠尿素酶(Urea)elisa试剂盒 | AsPC-1/GEM人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株 |
大鼠尿酸转运蛋白1(URAT1)elisa试剂盒 | 人骨髓肥大细胞 |
大鼠尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPAR)elisa试剂盒 | 人脾星状细胞 |
大鼠尿I型胶原N-末端肽交联(U-NTX)elisa试剂盒 | HCCLM3 (人高转移肝癌细胞) |
大鼠B-淋巴细胞激活抗原B7-1(LAB7-1；CD80)elisa试剂盒 | 人结直肠腺癌细胞带荧光素酶LS174T+LUC(STR鉴定正确) |
大鼠B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1;CXCL13)elisa试剂盒 | 大鼠滑膜间充质干细胞 |
猪血清总补体（CH50）elisa试剂盒 | 兔原代脑动脉血管内皮细胞 |
MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞专用培养基 | CLEC4F基因过表达细胞株 |
SNU-398人胃癌细胞专用培养基 | FAS基因过表达细胞株 |
兔原代椎体终板软骨干细胞专用培养基 | GPR88基因过表达细胞株 |
A549/DDP细胞专用培养基 | ZBTB39基因过表达细胞株 |
人原代类风湿关节炎滑膜成纤维细胞专用培养基 | NPHP1基因过表达细胞株 |
大鼠心脏干细胞T24细胞专用培养基 | DFFB基因过表达细胞株 |
AC16细胞专用培养基 | CCDC177基因过表达细胞株 |
无菌取大鼠心脏左心室组织，去除心内膜、心外膜，剪碎成细小组织块。
采用组织块贴壁培养法，将组织小块均匀铺于培养瓶底部，滴加干细胞专用培养基。
培养 7-10 天，待组织块周边爬出梭形细胞与球状干细胞克隆。
机械法挑取球状干细胞集落，轻柔吹打分散细胞团制备单细胞悬液。
使用干细胞无血清扩增培养基继续传代扩增，维持细胞干性特征。
通过 c-kit、Sca-1 流式检测鉴定心脏干细胞表面标志物表达水平。
定向诱导分化验证其向心肌、内皮细胞分化潜能，用于心脏修复研究。
