大鼠小气道平滑肌细胞

大鼠小气道平滑肌细胞

运用胶原酶消化法从Sprague-Dawley大鼠小气道平滑肌细胞血管组织中分离平滑肌细胞，经密度梯度离心纯化后接种于胶原 I 包被的培养表面，采用含有 10% FBS 和 5 ng/mL PDGF-BB 的 DMEM/F12 培养基进行体外扩增；通过 Western blot 和免疫荧光双重检测 α-SMA、SM22α、Calponin 及 SM-MHC 表达，并通过细胞迁移实验（Transwell）和收缩功能实验验证平滑肌细胞收缩表型。

产品名称：大鼠小气道平滑肌细胞

英文名称： Rat Small Airway Smooth Muscle Cells

组织来源： 支气管末端组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠小气道平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠小气道平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠小气道平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠小气道平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

解剖分离大鼠肺段小气道，剥离周围肺泡结缔组织，冷 PBS 反复冲洗气道腔内分泌物。

纵向剪开小气道管壁，刮除气道上皮层，仅保留平滑肌组织部分。

胶原酶 Ⅱ 与弹性蛋白酶混合消化液 37℃振荡消化 30min，解离平滑肌单细胞。

滤网过滤悬液，离心弃上清，用平滑肌专用完全培养基重悬沉淀接种培养瓶。

培养第 3 天首次换液，去除未贴壁杂质细胞，观察梭形细胞增殖情况。

细胞长至致密 “峰谷” 形态时进行传代，控制传代次数不超过 6 代。

可通过免疫荧光 α-SMA 染色鉴定纯度，后续用于气道收缩通路机制研究。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。