产品名称 | 大鼠小脑颗粒细胞 | 组织来源 | 小脑组织 |
英文名称 | Rat Cerebellar Granule Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3043 |
方法简介 实验室分离的大鼠小脑颗粒细胞采用胰蛋白酶消化法结合神经元专用培养基、化学试剂抑制法筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠小脑颗粒细胞经NSE免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 大鼠小脑颗粒细胞完全培养基(含B-27、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠小脑颗粒细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，需快速取材以保证神经元活力
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、Neurobasal培养基、B27添加剂、NGF、BDNF、NT-3、聚赖氨酸、脑基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标脑区/脊髓/神经组织，用预冷无钙镁PBS仔细冲洗
在显微镜下仔细分离目标区域，去除血管和膜组织，剪碎至1mm3
用0.25%胰蛋白酶在37度消化15-20分钟，加入DNase I辅助消化
用含FBS的DMEM终止消化，移液器轻柔吹打制成单细胞悬液
经40um滤网过滤后，300g离心5分钟收集神经元细胞
原代培养要点
将神经元细胞接种于聚赖氨酸包被的盖玻片或培养皿中，使用Neurobasal+B27培养基
接种密度建议1-2x10^5 cells/cm2，37度、5% CO2、95%湿度培养
神经元培养需添加NGF(10ng/mL)、BDNF(10ng/mL)等神经营养因子
7-14天后可观察到明显的神经元突起生长，21天后形成神经网络
常见问题优化
神经元存活率低：培养基中添加GlutaMAX和丙酮酸钠可提高神经元存活率
胶质细胞过度生长：使用Ara-C(10uM)处理可抑制胶质细胞增殖
神经元突起生长不良：添加NGF、BDNF等神经营养因子，使用脑基质胶包被基底
大鼠尿调素(UrM;UMOD)elisa试剂盒 | ACHN人肾细胞腺癌细胞 |
大鼠尿素(Urea)elisa试剂盒 | 人脾脏单核细胞 |
大鼠尿酸盐阴离子转运体1(URAT1)elisa试剂盒 | 人内皮祖细胞 |
大鼠泛醌氧化还原酶(UQO)elisa试剂盒 | EJ-1 (人膀胱癌细胞) (T24污染细胞系，暂不供应) |
大鼠Bcl-2相关死亡促进因子(BAD)elisa试剂盒 | 人系膜细胞UM-Chor1(STR鉴定正确) |
大鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)elisa试剂盒 | 大鼠结膜上皮细胞 |
猪血纤蛋白原（Fbg）elisa试剂盒 | 人原代支气管上皮细胞 |
MC38小鼠结肠癌细胞专用培养基 | HCK基因过表达细胞株 |
Snu-182人肝癌细胞专用培养基 | ADRA2B基因过表达细胞株 |
人原代肝外胆管上皮细胞专用培养基 | DCLRE1B基因过表达细胞株 |
A3细胞专用培养基 | FAM131A基因过表达细胞株 |
人原代淋巴结成纤维细胞专用培养基 | GCNA基因过表达细胞株 |
大鼠小脑颗粒细胞SW948细胞专用培养基 | CHRM5基因过表达细胞株 |
A673细胞专用培养基 | AOC2基因过表达细胞株 |
无菌取出新生大鼠小脑组织，预冷 HBSS 缓冲液漂洗去除脑膜与血管杂质。
眼科剪将组织剪碎至 1mm³ 小块，加入胰蛋白酶 - EDTA 消化液 37℃水浴轻柔孵育 18min。
加入含胎牛血清的完全培养基终止消化，巴氏管缓慢吹打制备单细胞悬液。
采用差速贴壁法去除成纤维杂细胞，将细胞悬液接种于多聚赖氨酸包被培养皿。
置于 37℃、5% CO₂细胞培养箱静置培养，48h 后更换新鲜神经元专用培养基。
每日镜检观察颗粒细胞轴突生长状态，及时清除漂浮死细胞碎片。
待细胞汇合度达 75%，可开展药物干预、电生理记录或基因转染相关实验。
