产品名称 | 大鼠小梁网细胞 | 组织来源 | 小梁网组织 |
英文名称 | Rat Trabecular Meshwork Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3052 |
方法简介 实验室分离的大鼠小梁网细胞采用组织贴块法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠小梁网细胞经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠小梁网细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠小梁网细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠尾加压素II(Urotensin II)elisa试剂盒 | AC16人心肌细胞 |
大鼠尿酸氧化酶(Uricase)elisa试剂盒 | 人CIK细胞 |
大鼠尿素酶(Urea)elisa试剂盒 | 人NK细胞 |
大鼠尿酸转运蛋白1(URAT1)elisa试剂盒 | ECV-304 (人脐静脉内皮细胞) (T24污染细胞系，暂不供应) |
大鼠Bcl2；腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)elisa试剂盒 | 人恶性黑色素瘤细胞带荧光素酶SK-MEL-2+luc（STR鉴定） |
大鼠BELSA(BELSA)elisa试剂盒 | 大鼠牙龈上皮细胞 |
猪血纤肽；纤维蛋白肽A（FPA）elisa试剂盒 | 小鼠原代胸腺基质细胞 |
MB49+LUC小鼠膀胱癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | ABRA基因过表达细胞株 |
snu-1人胃癌细胞专用培养基 | B3GNT3基因过表达细胞株 |
大鼠原代视网膜微血管周细胞专用培养基 | TARS3基因过表达细胞株 |
A375细胞专用培养基 | DMRT3基因过表达细胞株 |
人原代卵巢成纤维细胞专用培养基 | ZNF526基因过表达细胞株 |
大鼠小梁网细胞SW837细胞专用培养基 | ACTR3B基因过表达细胞株 |
A549细胞专用培养基 | AMBN基因过表达细胞株 |
前期准备：多聚赖氨酸包被培养板，预热小梁网专用培养基、预冷HBSS、复合胶原酶，无菌显微操作。
无菌取材：无菌摘取大鼠眼球，显微精细剥离眼前房小梁网组织，剔除虹膜、角膜及巩膜杂质。
组织处理：预冷HBSS漂洗小梁网组织，剪碎为细小碎片，彻底去除眼内杂质。
酶解消化：复合胶原酶37℃消化16min，间断轻柔吹打，解离小梁网细胞。
终止过滤：专用培养基终止消化，过滤去除组织残渣与微小杂质。
离心重悬：1000rpm低速离心5min，弃上清，小梁网专用培养基温和重悬细胞。
接种培养：低密度接种，静置培养48h不扰动，2d后半量换液，规律培养纯化细胞。
