大鼠小肠隐窝上皮细胞

大鼠小肠隐窝上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从Sprague-Dawley大鼠靶组织中分离小肠隐窝上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：大鼠小肠隐窝上皮细胞

英文名称： Rat Small Intestinal Crypt Epithelial Cells

组织来源： 小肠组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠小肠隐窝上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠小肠隐窝上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠小肠隐窝上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠小肠隐窝上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：明胶包被培养板，预热隐窝上皮专用培养基、预冷PBS、温和消化酶，无菌低温操作。

无菌取材：无菌摘取大鼠小肠，冲洗干净肠腔，截取小肠中段组织，剔除外层结缔组织。

组织处理：纵向剪开肠壁，轻柔刮取肠壁隐窝组织，漂洗去除绒毛上皮杂质。

酶解消化：温和消化酶37℃消化12min，轻柔吹打，解离隐窝上皮细胞。

终止过滤：专用培养基终止消化，过滤去除组织残渣与绒毛碎片。

离心重悬：1000rpm离心5min，弃上清，隐窝上皮专用培养基重悬细胞。

接种培养：适宜密度接种，静置培养24h换液，后续定期换液，维持隐窝细胞增殖活性。

1.取材后需立即将组织置于含10%胎牛血清的Hanks液中运输，4度条件下尽快完成目标脑区的分离与纯化。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.神经元为终末分化细胞，体外不具备增殖能力，建议分离后3-5天内完成电生理记录或免疫荧光等功能实验。

4.培养基中需补充B27(1:50稀释)和20uM L-谷氨酰胺，可维持神经元长期存活并促进突触形成。

5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠，年龄和体重需符合实验标准要求。 传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。