大鼠小肠Cajal间质细胞

方法简介  实验室分离的大鼠小肠Cajal间质细胞采用胶原酶消化法结合组织贴块法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠小肠Cajal间质细胞经c-kit免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠小肠Cajal间质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 不建议传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠小肠Cajal间质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前置准备

实验动物：SD大鼠，取目标组织

试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、相应专用培养基组分

分离纯化步骤

取实验动物目标组织，用预冷PBS冲洗去除血液和杂质

剪碎组织后采用胶原酶消化法(37度、1-2小时)分散细胞

过滤后300g离心8-10分钟收集细胞

根据细胞类型采用适当方法进一步纯化(密度梯度离心/免疫磁珠分选/差速贴壁)

原代培养要点

将纯化后的细胞接种于适当包被的培养皿中

使用含10%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养

每2-3天换液一次，根据细胞生长特性调整培养条件

常见问题优化

细胞得率低：根据组织特性优化消化时间和酶浓度

细胞纯度不高：采用多种纯化方法联合使用提高纯度

细胞表型维持：控制传代次数，必要时采用特殊培养基或包被基质

前期准备：无菌包被培养板，预热ICC专用培养基、预冷HBSS、复合消化酶，无菌低温精细操作。

无菌取材：无菌剥离大鼠小肠组织，冲洗肠腔内容物，剔除肠系膜与脂肪组织，保留肠壁肌层组织。

组织处理：HBSS漂洗肠壁组织，剪碎为细小碎片，去除黏膜层杂质，富集肌层间质组织。

酶解消化：复合酶液37℃消化17min，间断轻柔吹打，解离Cajal间质细胞。

终止过滤：专用培养基终止消化，过滤去除组织残渣与杂质。

离心重悬：1000rpm离心5min，弃上清，ICC专用培养基温和重悬细胞。

接种培养：低密度接种，静置培养48h换液，后续定期换液，纯化间质细胞。