大鼠下丘脑神经元细胞

大鼠下丘脑神经元细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的下丘脑神经元细胞来源脑组织或神经节中分离神经元细胞，经 0.25% 胰蛋白酶和胶原酶 II 联合消化后，接种于多聚赖氨酸（PLL）/纤连蛋白双包被的培养表面，使用 Neurobasal 培养基（含 B27 添加剂、NGF 及 GlutaMAX）培养；通过免疫荧光染色检测神经元特异性标志物 β-III-tubulin（Tuj1）、MAP2、NeuN 及 synapsin-1 表达，结合倒置显微镜观察神经元突起延伸形态，并经膜片钳记录验证动作电位发放功能。

产品名称：大鼠下丘脑神经元细胞

英文名称： Rat Hypothalamic Neurons

组织来源： 下丘脑组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠下丘脑神经元细胞采用胰蛋白酶消化法结合神经元专用培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠下丘脑神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 大鼠下丘脑神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 0.125%胰蛋白酶

大鼠下丘脑神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：多聚赖氨酸包被培养板过夜，预热神经元专用培养基、预冷HBSS、木瓜蛋白酶，无菌低温避光操作。

无菌取材：新生大鼠无菌断头，显微解剖剥离下丘脑脑组织，剔除大脑皮层、小脑及血管结缔组织。

组织处理：冰上精细剪碎下丘脑组织，轻柔松散，彻底去除脑膜与血管杂质。

酶解消化：木瓜蛋白酶37℃消化12min，间断轻柔吹打，解离神经元细胞。

终止过滤：神经元完全培养基终止消化，过滤去除脑组织残渣。

离心重悬：1000rpm低速离心5min，弃上清，神经专用培养基轻柔重悬细胞。

接种培养：适宜密度接种，静置培养48h不移动，2d后半量换液，可加药抑制胶质杂细胞。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。