大鼠下腔静脉内皮细胞

大鼠下腔静脉内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从Sprague-Dawley大鼠的下腔静脉内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：大鼠下腔静脉内皮细胞

英文名称： Rat Inferior Vena Cava Endothelial Cells

组织来源： 下腔静脉组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠下腔静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠下腔静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠下腔静脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠下腔静脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：多聚赖氨酸包被培养板，预热内皮专用培养基、预冷HBSS、Ⅰ型胶原酶，无菌精细器械备用。

无菌取材：无菌剥离大鼠下腔静脉，剔除血管外膜结缔组织与脂肪，保留完整血管内膜层。

组织处理：预冷HBSS冲洗血管内腔，剪碎血管内膜组织，漂洗去除血污杂质。

酶解消化：胶原酶灌注血管内腔，37℃消化12min，轻柔晃动解离内皮细胞。

终止过滤：内皮培养基终止消化，收集洗脱细胞液，过滤去除组织残渣。

离心重悬：1100rpm离心5min，弃上清，专用培养基温和重悬细胞。

接种培养：均匀接种，静置培养24h换液，后续规律换液，纯化血管内皮细胞。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。