产品名称 | 大鼠胃黏膜上皮细胞 | 组织来源 | 胃组织 |
英文名称 | Rat Gastric Mucosal Epithelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2838 |
方法简介 实验室分离的大鼠胃黏膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠胃黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠胃黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠胃黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠维生素B1(VB1)elisa试剂盒 | A375人恶性黑色素瘤细胞 |
大鼠血小板VASP;P2Y12(VASP;P2Y12)elisa试剂盒 | 人毛囊干细胞 |
大鼠维生素A(VA)elisa试剂盒 | 人增生性瘢痕成纤维细胞 |
大鼠三磷酸尿苷(UTP)elisa试剂盒 | BE (2)-M17 (人神经母细胞瘤细胞) |
大鼠ATP合成酶(ATPase)elisa试剂盒 | 大鼠骨髓瘤细胞Y3-Ag 1.2.3（种属鉴定） |
大鼠ATP结合盒转运蛋白B11(ABCB11；BSEP)elisa试剂盒 | 人蜕膜腺成纤维细胞 |
猪牙本质基质蛋白1（DMP1）elisa试剂盒 | 猪原代脂肪干细胞 |
TCCSUP人膀胱癌细胞专用培养基 | TMCC2基因过表达细胞株 |
SK-N-SH人神经母瘤细胞专用培养基 | DCLRE1B基因过表达细胞株 |
小鼠原代肝窦内皮细胞专用培养基 | SEMA3E基因过表达细胞株 |
9L/lacZ细胞专用培养基 | ZNF526基因过表达细胞株 |
人原代脑胶质瘤成纤维细胞专用培养基 | CHRM5基因过表达细胞株 |
大鼠胃黏膜上皮细胞SW480+luc细胞专用培养基 | ALX3基因过表达细胞株 |
A2780细胞专用培养基 | GABRQ基因过表达细胞株 |
前期准备：明胶包被培养板，预热胃上皮专用培养基、预冷无菌PBS、胰蛋白酶，无菌器械灭菌备用。
无菌取材：无菌剥离大鼠胃组织，冲洗胃腔内容物，剔除胃壁肌层与结缔组织，保留胃黏膜层。
组织处理：轻柔刮取胃黏膜上皮，剪碎为细小碎片，PBS多次漂洗去除黏液与食物残渣。
酶解消化：0.25%胰酶37℃消化11min，温和吹打，促使上皮细胞脱落解离。
终止过滤：血清培养基终止消化，过滤去除黏膜碎片与杂质。
离心重悬：1200rpm离心5min，弃上清，胃上皮专用培养基重悬细胞沉淀。
接种培养：定量接种，24h首次换液，后续隔天换液，维持上皮细胞纯培养。
