大鼠外周血淋巴细胞

大鼠外周血淋巴细胞

从Sprague-Dawley大鼠外周血淋巴细胞组织标本经机械研磨与胶原酶消化获取单细胞悬液，通过 Ficoll-Paque 密度梯度离心分离淋巴细胞层，经红细胞裂解液处理后再悬浮于含 10% FBS 的 RPMI-1640 培养基中，添加特异性细胞因子（如 IL-2 维持 T 细胞活性、IL-4 诱导 M2 极化）进行体外培养；通过免疫荧光染色检测 CD68、CD163（巨噬细胞极化标志）、CD3/CD4/CD8（T细胞标志）表达，并经功能实验

产品名称：大鼠外周血淋巴细胞

英文名称： Rat Peripheral Blood Lymphocytes

组织来源： 外周血

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠外周血淋巴细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠外周血淋巴细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠外周血淋巴细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠外周血淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：无菌抗凝管、淋巴细胞分离液、预冷无菌PBS、淋巴细胞专用培养基，低温无菌操作。

无菌取材：大鼠无菌外周血采集，充分抗凝混匀，无凝血、无溶血污染。

组织处理：PBS等比例稀释血液，轻柔混匀，优化分层分离效果。

酶解消化：无酶解步骤，纯物理密度梯度分离。

终止过滤：离心分层后吸取淋巴细胞层，PBS漂洗2次去除残留分离液。

离心重悬：1000rpm离心5min，弃上清，专用培养基轻柔重悬细胞。

接种培养：悬浮培养，24h换液去除死细胞，后续按需半量换液，维持淋巴细胞活性。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.细胞接种密度对实验结果影响显著，建议根据实验目的优化接种密度参数。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠，年龄和体重需符合实验标准要求。 细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。