大鼠外周血来源内皮祖细胞

大鼠外周血来源内皮祖细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离Sprague-Dawley大鼠外周血来源内皮祖细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：大鼠外周血来源内皮祖细胞

英文名称： Rat Peripheral Blood-Derived Endothelial Progenitor Cells

组织来源： 外周血

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠外周血来源内皮祖细胞采用采集外周血、密度梯度离心、差速贴壁法结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠外周血来源内皮祖细胞经CD34免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠外周血来源内皮祖细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代；不建议多次传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠外周血来源内皮祖细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：多聚赖氨酸包被培养板，预热内皮祖细胞专用培养基、分离液、预冷PBS，无菌低温操作。

无菌取材：无菌采集大鼠外周血，抗凝混匀，低温静置，避免细胞活性损伤。

组织处理：PBS稀释外周血，轻柔混匀，通过密度梯度法初步分离单个核细胞组分。

酶解消化：无需酶解，通过贴壁筛选法纯化内皮祖细胞。

终止过滤：收集单个核细胞悬液，过滤去除微小杂质与细胞团块。

离心重悬：1000rpm离心5min，弃上清，内皮祖专用培养基重悬细胞。

接种培养：接种于包被板，静置培养48h换液，去除悬浮杂细胞，定期换液扩增纯化内皮祖细胞。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。