大鼠外周血单个核细胞

大鼠外周血单个核细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从Sprague-Dawley大鼠外周血单个核细胞组织获取目标细胞，经密度梯度离心和预培养纯化后接种于特异性基质包被培养皿中，采用优化培养基体系（含 10% FBS 及针对性添加剂）维持培养；通过免疫细胞化学、流式细胞术及分子生物学方法综合鉴定细胞类型，并评估其体外增殖与功能特性。

产品名称：大鼠外周血单个核细胞

英文名称： Rat Peripheral Blood Mononuclear Cells

组织来源： 外周血

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠外周血单个核细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠外周血单个核细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠外周血单个核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠外周血单个核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：无菌抗凝耗材、单个核细胞分离液、预冷无菌PBS、专用培养基，全程低温无菌操作。

无菌取材：无菌采集大鼠外周血，抗凝处理充分混匀，防止血液凝固，低温保存备用。

组织处理：PBS等量稀释外周血，轻柔颠倒混匀，保证血液稀释均匀。

酶解消化：无酶解步骤，采用密度梯度离心法分离单个核细胞。

终止过滤：分层离心后吸取云雾状单个核细胞层，PBS充分漂洗去除分离液残留。

离心重悬：1000rpm低速离心5min，弃上清，专用培养基重悬细胞沉淀。

接种培养：悬浮接种培养，24h换液去除死细胞，后续按需换液，维持细胞活性。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。