大鼠外周血白细胞

大鼠外周血白细胞

采用密度梯度离心法从Sprague-Dawley大鼠的外周血白细胞来源血液或组织中分离免疫细胞，经 NH₄Cl 裂解红细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 RPMI-1640 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL M-CSF/G-CSF）培养；通过流式细胞术检测 CD11b、F4/80（大鼠）、CD14、CD86 等巨噬细胞/免疫细胞标志物表达，结合 MTT 增殖实验和吞噬功能实验（荧光微球吞噬 assay）验证免疫细胞活性与功能。

产品名称：大鼠外周血白细胞

英文名称： Rat Peripheral Blood Leukocytes

组织来源： 外周血

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠外周血白细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠外周血白细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠外周血白细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠外周血白细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：备好无菌抗凝采血管、淋巴细胞分离液、预冷PBS、完全培养基，无菌超净台低温操作。

无菌取材：大鼠眼眶取外周血，加入抗凝管轻柔混匀，避免凝血，低温静置备用。

组织处理：无菌PBS等比例稀释外周血，轻柔吹打混匀，降低血液黏稠度，便于分层分离。

酶解消化：无需酶解，采用密度梯度分离法，将稀释血液缓慢叠加于分离液液面。

终止过滤：高速水平离心后，吸取中间白色白细胞层，PBS漂洗去除杂质。

离心重悬：1000rpm离心5min，弃上清，完全培养基轻柔重悬白细胞沉淀。

接种培养：调整细胞密度接种，悬浮静置培养，隔天半量换液，维持白细胞活性。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。