大鼠视网膜微血管内皮细胞

大鼠视网膜微血管内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从Sprague-Dawley大鼠的视网膜微血管内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：大鼠视网膜微血管内皮细胞

英文名称： Rat Retinal Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 视网膜组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠视网膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠视网膜微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠视网膜微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠视网膜微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：多聚赖氨酸包被培养板，预热内皮专用培养基、预冷HBSS、Ⅱ型胶原酶，备好精细筛网，无菌低温操作。

无菌取材：无菌剥离大鼠视网膜组织，剔除大血管、神经及色素组织，保留微血管丰富区域，预冷漂洗。

组织处理：冰上剪碎视网膜微血管组织，轻柔研磨松散，富集微血管片段。

酶解消化：胶原酶37℃消化16min，间断轻晃，使微血管内皮细胞充分解离。

终止过滤：内皮培养基终止消化，过滤去除组织残渣与血管碎片。

离心重悬：1100rpm离心5min，弃上清，专用培养基温和重悬细胞。

接种培养：均匀接种，静置培养24h换液，后续规律换液，纯化微血管内皮细胞。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。