大鼠食管平滑肌细胞

大鼠食管平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的食管平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：大鼠食管平滑肌细胞

英文名称： Rat Esophageal Smooth Muscle Cells

组织来源： 食管组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠食管平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠食管平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠食管平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠食管平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：无菌培养板常规预处理，预热平滑肌专用培养基、预冷HBSS、Ⅱ型胶原酶，备好精细解剖器械，无菌避光操作。

无菌取材：无菌剥离大鼠食管组织，剔除食管外层结缔组织、脂肪及内层黏膜上皮，保留中间完整平滑肌肌层。

组织处理：预冷HBSS漂洗肌层组织，剪碎至1mm³细小组织块，彻底去除残留黏膜与血管杂质。

酶解消化：Ⅱ型胶原酶37℃水浴消化18min，间断轻晃，使平滑肌组织充分松散解离。

终止过滤：完全培养基终止酶解，轻柔吹打分散细胞，过滤去除未消化组织残渣。

离心重悬：1200rpm离心5min，弃上清，平滑肌专用培养基轻柔重悬细胞。

接种培养：均匀接种细胞，静置培养24h换液，后续每2–3d换液，通过差速贴壁去除成纤维杂细胞。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。