产品名称 | 大鼠肾脏巨噬细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Rat Renal Macrophages | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3091 |
方法简介 实验室分离的大鼠肾脏巨噬细胞采用酶消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠肾脏巨噬细胞经F4/80免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠肾脏巨噬细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 巨噬细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 利多卡因（12 mM）
大鼠肾脏巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠血管内皮细胞生长因子121b(VEGF121b)elisa试剂盒 | OAR-L1绵羊肺成纤维细胞（原代永生化） |
大鼠维生素E(VE)elisa试剂盒 | 人破骨细胞 |
大鼠电压依赖性阴离子通道蛋白1(VDAC1)elisa试剂盒 | 人毛囊成纤维细胞 |
大鼠维生素D(VD)elisa试剂盒 | U251 (人胶质瘤细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)elisa试剂盒 | 大鼠皮肤成纤维细胞 |
大鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)elisa试剂盒 | 人T淋巴细胞 |
猪胰岛素生长因子2（IGF-2）elisa试剂盒 | 小鼠原代造血干细胞 |
SW620人结直肠腺癌细胞专用培养基 | ARSG基因过表达细胞株 |
SK-MEL-1人皮肤黑色素瘤细胞专用培养基 | GDF9基因过表达细胞株 |
大鼠原代小肠隐窝上皮细胞专用培养基 | JHY基因过表达细胞株 |
143B细胞专用培养基 | AOC2基因过表达细胞株 |
人原代脾脏单核细胞专用培养基 | FOXF2基因过表达细胞株 |
大鼠肾脏巨噬细胞SU-DHL-4细胞专用培养基 | ABI3基因过表达细胞株 |
3T3-L1细胞专用培养基 | TLE2基因过表达细胞株 |
前期准备：无包被培养板预处理，预热巨噬细胞专用培养基、预冷无菌PBS、细胞分离液，备好无菌离心管、筛网，全程低温无菌。
无菌取材：无菌摘取大鼠肾脏，剔除包膜与血管，剪取完整肾组织，预冷PBS漂洗去除残留血液与杂质。
组织处理：无菌剪碎肾组织至匀浆状，轻柔研磨破碎组织，释放组织驻留巨噬细胞，PBS稀释混匀。
酶解消化：温和胰酶低温短时消化8min，轻柔晃动，充分释放组织内巨噬细胞，避免细胞损伤。
终止过滤：完全培养基终止消化，过滤去除组织残渣，获得粗制细胞悬液，备用分离纯化。
离心重悬：采用密度梯度离心法分离巨噬细胞，1000rpm离心6min，弃上清，专用培养基重悬纯化细胞。
接种培养：调整密度接种，静置培养12h使细胞贴壁，更换新鲜培养基，后续隔天换液，维持巨噬细胞活性与纯度。
