大鼠肾小球系膜细胞

大鼠肾小球系膜细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从Sprague-Dawley大鼠肾小球系膜细胞组织获取目标细胞，经密度梯度离心和预培养纯化后接种于特异性基质包被培养皿中，采用优化培养基体系（含 10% FBS 及针对性添加剂）维持培养；通过免疫细胞化学、流式细胞术及分子生物学方法综合鉴定细胞类型，并评估其体外增殖与功能特性。

产品名称：大鼠肾小球系膜细胞

英文名称： Rat Glomerular Mesangial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肾小球系膜细胞采用机械研磨法结合不同孔径不锈钢网筛过滤后使用胶原酶消化制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肾小球系膜细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 大鼠肾小球系膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肾小球系膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：常规无菌培养板预处理，预热系膜细胞专用培养基、预冷PBS、胰酶消化液，备好无菌筛网、离心器材，低温无菌操作。

无菌取材：无菌分离大鼠肾皮质，剔除所有髓质、血管及包膜组织，预冷PBS充分漂洗，清除血污杂质。

组织处理：剪碎皮质组织，研磨过滤富集肾小球，去除肾小管碎片与间质组织，纯化肾小球样本。

酶解消化：胰酶工作液37℃消化12min，温和晃动，使肾小球系膜细胞充分解离，保留细胞活性。

终止过滤：血清培养基终止消化，吹打混匀后过滤，去除未消化肾小球囊壁组织，收集系膜细胞悬液。

离心重悬：1100rpm离心5min，弃上清，专用培养基轻柔重悬细胞沉淀，制备单细胞悬液。

接种培养：接种后静置培养，24h首次换液，后续每2d换液，通过差速贴壁纯化系膜细胞，去除上皮、内皮杂细胞。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。