大鼠肾实质细胞

大鼠肾实质细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的肾实质细胞来源组织中分离原代细胞，经胶原酶 II 和胰蛋白酶联合消化后，通过密度梯度离心纯化目标细胞，接种于明胶包被的培养皿中使用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、1% 双抗）培养；通过免疫荧光染色检测细胞特异性标志物表达，结合形态学观察和 RT-qPCR 分子鉴定确认细胞身份。

产品名称：大鼠肾实质细胞

英文名称： Rat Renal Parenchymal Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肾实质细胞采用胶原酶-胰蛋白酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肾实质细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠肾实质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肾实质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备：常规无菌培养板预处理，预热肾实质细胞专用完全培养基、预冷PBS、胰酶-EDTA消化液，备好无菌过滤筛、离心管，全程低温无菌操作。

无菌取材：处死大鼠后无菌取双侧肾脏，完整剔除包膜、肾盂及血管结缔组织，保留完整肾实质整体组织，预冷PBS充分漂洗去除残留血液。

组织处理：将肾实质组织均匀剪碎至1mm³组织块，PBS反复漂洗2次，去除游离血细胞与破碎组织，保留完整活性组织块。

酶解消化：加入胰酶-EDTA混合消化液，37℃消化12–15min，期间间断晃动离心管，促进组织充分解离，避免局部消化过度。

终止过滤：血清培养基终止消化，轻柔吹打分散细胞，经70μm筛网过滤，截留未消化组织块，收集纯净细胞悬液。

离心重悬：1200rpm离心5min，弃上清，用预热完全培养基轻柔重悬细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液。

接种培养：定量接种细胞，置于37℃、5%CO₂培养箱；24h换液去除悬浮死细胞，后续每2–3d常规半量换液，稳定细胞生长状态。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.该细胞体外可传10-15代，建议采用低代次细胞进行实验，高代次细胞可能出现表型漂移和凝集素摄取能力下降。

4.培养基中需添加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10ug/ml肝素，促进内皮细胞增殖并维持表型。

5.培养期间每48小时换液一次，观察细胞融合情况，融合度达90%以上时进行传代处理。