大鼠神经小胶质细胞

大鼠神经小胶质细胞

从Sprague-Dawley大鼠神经小胶质细胞脑组织标本经机械分离与胶原酶/DNAse 联合消化获取单细胞悬液，通过 37°C 预贴壁去除贴壁细胞（星形胶质细胞/成纤维细胞）后，将悬浮细胞转种于 PLL 包被培养皿中，使用含 B27、NGF 及 CNTF 的 Neurobasal 培养基培养小胶质细胞/神经胶质细胞；通过流式细胞术检测 CD11b/c、CR3（Mac-1）、MHC-II 表达，免疫荧光显示 Iba1/GFAP 阳性，并结合 LPS 刺激后细胞因子释放实验验证免疫应答功能。

产品名称：大鼠神经小胶质细胞

英文名称： Rat Microglial Cells

组织来源： 大脑皮质组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠神经小胶质细胞采用酶消化法结合差速贴壁法，在培养基营养缺失数天后经摇床震荡收集脱落细胞制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠神经小胶质细胞经CD11b免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠神经小胶质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 利多卡因（12 mM）

大鼠神经小胶质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

实验准备：配制小胶质细胞专用培养基，预冷无菌缓冲液、精细解剖器械，选取新生大鼠全脑组织。

无菌取材：无菌摘取大鼠完整大脑，剔除脑膜、大血管，冰上预冷HBSS反复漂洗去除血污。

组织处理：充分剪碎脑组织，轻柔研磨松散，释放脑组织内固有小胶质细胞。

酶解消化：低浓度胰酶37℃消化15min，轻柔吹打，温和解离小胶质细胞。

纯化离心：培养基终止消化，过滤纯化，1200rpm离心5min，收集小胶质细胞沉淀。

接种培养：专用培养基重悬接种，恒温培养箱静置混合培养。

常规养护：培养7天后震荡纯化收集悬浮小胶质细胞，换液培养，维持细胞静息状态。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.培养皿经常规消毒处理即可使用，成纤维细胞对培养表面要求不高，贴壁速度快。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.培养基中添加10-15%胎牛血清即可满足成纤维细胞生长需求，高血清浓度可加速细胞增殖。

5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠，年龄和体重需符合实验标准要求。 换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。