大鼠前列腺干细胞

运用密度梯度离心法从Sprague-Dawley大鼠前列腺干细胞组织中分离间充质干细胞,经预培养去除非贴壁细胞后,选用含 10% FBS 和 2 mM L-谷氨酰胺的 DMEM/F12 培养基进行扩增;通过免疫荧光染色检测 Nanog、Oct4、Sox2 等多能性标志物表达,流式细胞术分析 CD34-、CD45-、HLA-DR- 表型,并经体外诱导分化实验(成骨/成脂/成软骨)验证多向分化潜能。

产品名称:大鼠前列腺干细胞
英文名称: Rat Prostate Stem Cells
组织来源: 前列腺组织
默认种属 :SD大鼠
产品规格:5×10^5Cells/T25
方法简介 实验室分离的大鼠前列腺干细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过前列腺干细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠前列腺干细胞经Sca-1免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基: 大鼠前列腺干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 长梭形
传代比例: 1:2
传代特性: 可传3代左右
消化液: 0.25%胰蛋白酶
大鼠前列腺干细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。

实验准备:配制干细胞专用无血清培养基,准备无菌分离耗材、细胞筛,提前预热缓冲液,选用幼年大鼠前列腺组织。
无菌取材:无菌摘取大鼠前列腺组织,无菌PBS漂洗,剔除多余结缔组织与血管,保留完整腺体核心组织。
组织处理:无菌条件下充分剪碎前列腺组织,研磨松散组织结构,最大程度释放干细胞组分。
酶解消化:温和复合酶液37℃低速消化35min,轻柔震荡,避免干细胞损伤,保证细胞活性。
纯化离心:无血清培养基终止消化,梯度过滤纯化,1000rpm低速离心6min,收集干细胞沉淀。
接种培养:干细胞专用无血清培养基重悬,低密接种,置于低氧恒温培养箱悬浮/贴壁培养。
常规养护:每2天半量更换干细胞培养基,不扰动细胞球,维持干细胞干性,避免分化,按需传代扩增。

1.操作过程需保持低温环境,室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。
2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜,以增强细胞贴壁能力。
3.该细胞对培养条件较为敏感,建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。
4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。
5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠,年龄和体重需符合实验标准要求。 细胞融合度达到70-80%时传代,胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。

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