产品名称 | 大鼠脐动脉内皮细胞 | 组织来源 | 脐带组织 |
英文名称 | Rat Umbilical Artery Endothelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3507 |
方法简介 实验室分离的大鼠脐动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠脐动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 大鼠脐动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠脐动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠玻连蛋白(VTN)elisa试剂盒 | PC12低分化+GFP大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞低分化+GFP |
大鼠液泡蛋白分拣蛋白13D(VPS13D)elisa试剂盒 | 人子宫内膜基质细胞 |
大鼠极低密度脂蛋白受体(VLDLR)elisa试剂盒 | 人附睾成纤维细胞 |
大鼠迟现抗原4(VLA4)elisa试剂盒 | RBE (人肝胆管癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠8-氧鸟嘌呤(8-oxoG)elisa试剂盒 | 人舌鳞癌细胞SCC-4(STR鉴定正确) |
大鼠8-异构前列腺素(8-isoprostane)elisa试剂盒 | 兔肺微血管内皮细胞 |
猪抑制素A（INH-A）elisa试剂盒 | 兔原代睾丸支持细胞 |
snu-1人胃癌细胞专用培养基 | HDC基因过表达细胞株 |
RWPE-1人前列腺正常细胞专用培养基 | HCK基因过表达细胞株 |
小鼠原代主动脉瓣膜间质细胞专用培养基 | TMCC2基因过表达细胞株 |
小鼠原代卫星胶质细胞专用培养基 | IQCA1L基因过表达细胞株 |
人原代肾间质成纤维细胞专用培养基 | ASMT基因过表达细胞株 |
大鼠脐动脉内皮细胞SK-N-SH细胞专用培养基 | GPR52基因过表达细胞株 |
小鼠原代肾盂输尿管连接处cajal间质细胞专用培养基 | AMDHD1基因过表达细胞株 |
无菌分离孕鼠胎鼠脐带，在冰上精准剥离两条脐动脉，预冷 PBS 冲洗管腔冲净残留血液。
纵向剪开脐动脉血管壁，内膜面朝上铺于无菌培养皿，棉签轻拭去除外膜结缔组织。
加入 0.1%Ⅱ 型胶原酶浸没血管内膜，37℃恒温消化 15–25min，让内皮细胞脱落。
加入内皮细胞完全培养基终止酶消化，反复吹打血管内壁收集细胞悬液，细胞筛过滤。
1200rpm 离心 5min 弃上清，内皮专用培养基重悬沉淀，接种于明胶包被培养板。
培养箱静置孵育，24h 首次换液去除未贴壁细胞，后续每 2–3d 更换新鲜培养基。
细胞汇合后可传代，通过 vWF 免疫荧光鉴定内皮纯度，开展血管功能相关实验。
