大鼠皮层神经元细胞

大鼠皮层神经元细胞

运用胶原酶 IV 和 Dispase 联合消化法从Sprague-Dawley大鼠皮层神经元细胞神经组织中分离神经元前体细胞，经密度梯度离心纯化后接种于 PLL 包被的培养皿中，采用含 B-27 supplement、NGF（10 ng/mL）和 bFGF（5 ng/mL）的 Neurobasal 完全培养基培养；通过免疫荧光双标检测 β-III-tubulin/Map2 共表达，免疫细胞化学染色显示突触蛋白（Synaptophysin）阳性，并经钙成像实验检测神经元电生理活性。

产品名称：大鼠皮层神经元细胞

英文名称： Rat Cortical Neurons

组织来源： 大脑皮质组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠皮层神经元细胞采用胰蛋白酶消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠皮层神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 大鼠皮层神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 0.125%胰蛋白酶

大鼠皮层神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备（提前 1 天）

用多聚赖氨酸（PDL）包被培养板 / 瓶，过夜；次日无菌水漂洗 3 次，晾干备用。

器械高压灭菌，预冷 HBSS/PBS、Neurobasal+B27 完全培养基，水浴预热 37℃。

取材选择：孕鼠 E17–E18 胚胎 或 出生 24h 内乳鼠。

二、取材与解剖（全程冰上无菌操作）

孕鼠麻醉 / 处死后取出子宫，剥离胚胎；乳鼠直接断头，75% 乙醇消毒头部。

剪开颅骨取出完整大脑，置于预冷 HBSS。

分离双侧大脑皮层，彻底撕掉脑膜与血管（关键，否则胶质污染重），弃小脑、海马、中脑。

预冷 PBS 漂洗皮层 2–3 次。

三、组织消化制单细胞悬液

用剪刀把皮层剪碎成约 1mm³ 小组织块，转入离心管。

加 0.25% 胰酶（或木瓜蛋白酶），37℃水浴消化12–15 min，中途轻晃几次。

加含血清培养基终止消化，巴氏管轻柔吹打组织块至无肉眼可见碎块。

经 70μm 细胞筛过滤，去除残留组织团。

1200 rpm 离心 5 min，弃上清。

四、接种培养

沉淀用神经元完全培养基（Neurobasal +2% B27 + 谷氨酰胺 + 双抗）重悬，计数。

按目标密度接种到 PDL 包被板，放37℃、5% CO₂培养箱静置。

接种 48h 后首次半量换液，之后每 2–3 天半量换液（勿全换，避免应激死亡）。

若需高纯度神经元：接种后可加阿糖胞苷抑制胶质细胞增殖，24h 后换液洗去药物。

五、后续常用节点

培养7 天左右神经元成熟、突触网络发达，适合给药、造模、电生理、免疫荧光。

1.取材后需立即将组织置于含10%胎牛血清的Hanks液中运输，4度条件下尽快完成目标脑区的分离与纯化。

2.培养器皿必须提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板神经元无法贴壁，轴突几乎不能正常延伸。

3.神经元为终末分化细胞，体外不具备增殖能力，建议分离后3-5天内完成电生理记录或免疫荧光等功能实验。

4.在基础培养基中添加NGF(100ng/ml)、BDNF(20ng/ml)及GDNF(10ng/ml)三种神经营养因子，可显著提高神经元存活率。

5.换液操作需极其轻柔，使用预温的培养基沿培养壁缓慢加入，避免液流冲击导致贴壁不牢的神经元脱落。