产品名称 | 大鼠胚胎干细胞 | 组织来源 | 囊胚 |
英文名称 | Rat Embryonic Stem Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3421 |
方法简介 实验室分离的大鼠胚胎干细胞采用分离囊胚组织，去除胚胎透明带、使用特制专用培养基筛选培养，胰酶消化传代纯化制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠胚胎干细胞经Oct-4免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 明胶（0.1%）
培养基： 大鼠胚胎干细胞完全培养基(含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 圆形、卵圆形、球形克隆
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右
消化液： 0.025%胰蛋白酶
大鼠胚胎干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员10A(WNT10A)elisa试剂盒 | L6大鼠成肌细胞 |
大鼠含WD重复域蛋白62(WDR62)elisa试剂盒 | 人附睾管上皮细胞 |
大鼠玻连蛋白(VTN)elisa试剂盒 | 人睾丸白膜上皮细胞 |
大鼠液泡蛋白分拣蛋白13D(VPS13D)elisa试剂盒 | NIH:OVCAR-3 [OVCAR3] (人卵巢癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠7-脱氢胆固醇(7-DHC)elisa试剂盒 | 人食管鳞癌细胞KYSE-140(STR鉴定正确) |
大鼠8,9-EET(8,9-EET)elisa试剂盒 | 绵羊前脂肪细胞（皮下来源） |
猪硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）elisa试剂盒 | 小鼠原代胃成纤维细胞 |
SK-OV-3+LUC人卵巢癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | COQ8B基因过表达细胞株 |
RKO人结肠腺癌细胞专用培养基 | ACOT4基因过表达细胞株 |
人原代皮脂腺癌细胞专用培养基 | CNGA3基因过表达细胞株 |
小鼠原代胸腺基质细胞专用培养基 | ARSG基因过表达细胞株 |
人原代肾小球系膜细胞专用培养基 | FMOD基因过表达细胞株 |
大鼠胚胎干细胞SK-N-BE(2)细胞专用培养基 | CYP11A1基因过表达细胞株 |
大鼠原代肌腱细胞专用培养基 | ABHD15基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
饲养层细胞（提前制备 REF 饲养层板）、超净无菌器械、四孔板
试剂：ES 细胞专用培养基、LIF 白血病抑制因子、胰酶、PBS
二、取材与预处理
超净环境下获取孕 4.5d 大鼠囊胚，PBS 冲洗胚胎去除子宫组织杂质。
显微操作剥离囊胚透明带，分离内细胞团 ICM。
三、细胞分离与消化
内细胞团小块轻微胰酶短时解离，避免单细胞过度损伤。
加入 ES 完全培养基立即终止消化。
四、纯化与接种培养
将细胞团接种至铺有灭活胚胎成纤维饲养层的培养板。
加入含 LIF 的 ES 培养基，隔天半量换液，观察鸟巢状克隆。
克隆增大后机械法挑取阳性 ES 克隆传代扩增，防止自发分化。
