大鼠胚胎肝母细胞

大鼠胚胎肝母细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从Sprague-Dawley大鼠胚胎肝母细胞组织获取目标细胞，经密度梯度离心和预培养纯化后接种于特异性基质包被培养皿中，采用优化培养基体系（含 10% FBS 及针对性添加剂）维持培养；通过免疫细胞化学、流式细胞术及分子生物学方法综合鉴定细胞类型，并评估其体外增殖与功能特性。

产品名称：大鼠胚胎肝母细胞

英文名称： Rat Embryonic Hepatoblasts

组织来源： 胚胎肝组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠胚胎肝母细胞采用胶原酶消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠胚胎肝母细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠胚胎肝母细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠胚胎肝母细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微解剖镊、离心管、包被培养板、滤网

试剂：无血清肝细胞培养基、Ⅳ 型胶原酶、PBS、DNase

二、取材与预处理

取孕 14~16d 胚胎，无菌分离胚胎肝脏组织，PBS 漂洗去除红细胞。

剪碎肝组织小块，冰上暂存。

三、细胞分离与消化

胶原酶循环灌流消化肝组织，37℃消化 40min。

终止消化后轻柔吹打，滤网过滤，低速离心富集肝母细胞。

梯度离心去除红细胞与坏死细胞。

四、纯化与接种培养

专用肝细胞培养基接种包被培养板，低血清条件培养。

48h 半量换液，减少杂细胞污染。

严格控制传代次数，防止肝母细胞定向分化。

1.取材后需立即将组织置于含10%胎牛血清的Hanks液中运输，4度条件下尽快完成目标脑区的分离与纯化。

2.培养器皿必须提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板神经元无法贴壁，轴突几乎不能正常延伸。

3.该细胞属于终末分化细胞，体外完全不增殖，全程禁止传代操作，所有功能实验必须在分离后7天内完成，避免神经元自发凋亡。

4.在基础培养基中添加NGF(100ng/ml)、BDNF(20ng/ml)及GDNF(10ng/ml)三种神经营养因子，可显著提高神经元存活率。

5.培养期间每2-3天半量换液一次，换液时用移液枪沿壁缓慢加入避免产生液流剪切力损伤神经元突起。