产品名称 | 大鼠胚肺成纤维细胞 | 组织来源 | 胚胎；肺组织 |
英文名称 | Rat Embryonic Lung Fibroblasts | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3212 |
方法简介 实验室分离的大鼠胚肺成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠胚肺成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠胚肺成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠胚肺成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员2(WNT2)elisa试剂盒 | IEC-18大鼠回肠细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员10A(WNT10A)elisa试剂盒 | 人睾丸白膜成纤维细胞 |
大鼠WNT抑制因子1(WIF1)elisa试剂盒 | 人宫颈平滑肌细胞 |
大鼠玻连蛋白(VTN)elisa试剂盒 | NCI-H292 (人肺癌细胞(淋巴结转移)) (STR鉴定正确) |
大鼠70kDa热休克蛋白6(HSPA6)elisa试剂盒 | 大鼠少突胶质前体细胞系OLN-93（种属鉴定） |
大鼠7α-羟化酶25-羟基胆固醇(7α，25HC)elisa试剂盒 | 人毛囊角质细胞 |
猪游离胆固醇（FC）elisa试剂盒 | 大鼠原代肺微血管内皮细胞 |
SK-OV-3人卵巢癌细胞专用培养基 | BIVM基因过表达细胞株 |
RPMI8226人多发性骨髓瘤细胞专用培养基 | NFKBIZ基因过表达细胞株 |
大鼠原代颈动脉成纤维细胞专用培养基 | SLC45A4基因过表达细胞株 |
小鼠原代输尿管平滑肌细胞专用培养基 | EBF3基因过表达细胞株 |
人原代食管癌相关成纤维细胞专用培养基 | CCDC81基因过表达细胞株 |
大鼠胚肺成纤维细胞SK-MEL-5细胞专用培养基 | APCDD1L基因过表达细胞株 |
小鼠原代卫星胶质细胞专用培养基 | ETNPPL基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
解剖器械、培养皿、离心管、200 目筛网
试剂：预冷 PBS、DMEM 完全培养基、0.25% 胰酶
二、取材与预处理
处死孕鼠，无菌取出胚胎，分离胚胎双肺组织。
PBS 漂洗肺组织去除血水，剔除气管杂质，剪碎肺组织。
三、细胞分离与消化
胰酶 37℃消化 30min，多次吹打解离组织团块。
血清终止消化，滤网过滤，离心收集细胞沉淀，洗涤 2 次。
四、纯化与接种培养
重悬后接种培养瓶，差速贴壁富集成纤维细胞。
24h 首次换液，后续每 2~3 天换液。
细胞增殖速度快，汇合后及时分瓶传代。
