大鼠膀胱平滑肌细胞

大鼠膀胱平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从Sprague-Dawley大鼠膀胱平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：大鼠膀胱平滑肌细胞

英文名称： Rat Bladder Smooth Muscle Cells

组织来源： 膀胱组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠膀胱平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠膀胱平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠膀胱平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠膀胱平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微器械、滤网、离心管、培养瓶

试剂：PBS、DMEM+10% FBS、Ⅰ 型胶原酶消化液

二、取材与预处理

剪开膀胱，刮除上皮黏膜层，剥离膀胱平滑肌肌层组织。

PBS 漂洗血块，充分剪碎肌条组织。

三、细胞分离与消化

胶原酶 37℃消化 50min，充分解离肌束组织。

终止消化、过滤、离心，PBS 洗涤细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

接种培养瓶贴壁培养，24h 换液。

细胞呈梭形交叉生长，每 3 天换液。

传代培养，α-SMA 标记鉴定平滑肌细胞。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞增殖迅速，原代培养2-3周可获得足够细胞，传代后可维持培养15-20代左右。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。