产品名称 | 大鼠膀胱成纤维细胞 | 组织来源 | 膀胱组织 |
英文名称 | Rat Bladder Fibroblasts | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2931 |
方法简介 实验室分离的大鼠膀胱成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠膀胱成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠膀胱成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠膀胱成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员5b(WNT5b)elisa试剂盒 | H4-II-E-C3 大鼠肝癌细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员2(WNT2)elisa试剂盒 | 人卵巢囊肿细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员10B(WNT10B)elisa试剂盒 | 人子宫内膜间质细胞 |
大鼠WNT抑制因子1(WIF1)elisa试剂盒 | NAMALWA (人Burkitt's淋巴瘤细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠70kDaζ链关联蛋白激酶(zAP70)elisa试剂盒 | B细胞淋巴瘤DOHH2(STR鉴定正确) |
大鼠70kDa热休克蛋白5(HSPA5)elisa试剂盒 | 小鼠胃成纤维细胞 |
猪游离血红蛋白（f-Hb）elisa试剂盒 | 小鼠肾脏巨噬细胞 |
SK-NO-1人急性髓系白血病细胞专用培养基 | ZYG11B基因过表达细胞株 |
REH人急性非B非T淋巴白血病细胞专用培养基 | TMCC2基因过表达细胞株 |
羊原代子宫内膜上皮细胞专用培养基 | B3GNT8基因过表达细胞株 |
人原代脑微血管平滑肌细胞专用培养基 | FGR基因过表达细胞株 |
人原代食管上皮细胞专用培养基 | GPR52基因过表达细胞株 |
大鼠膀胱成纤维细胞SK-MEL-2+luc细胞专用培养基 | BRME1基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜基质细胞专用培养基 | DPF3基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
解剖剪镊、离心管、培养瓶、细胞筛
试剂：PBS、DMEM 完全培养基、0.25% 胰蛋白酶
二、取材与预处理
解剖摘取大鼠膀胱，剪开膀胱壁，PBS 冲净内部尿液。
刮除膀胱内侧移行上皮层，保留膀胱肌层外结缔组织，剪碎组织。
三、细胞分离与消化
胰酶 37℃消化 25min，间断吹打打散组织。
血清终止消化，过滤后离心收集细胞，PBS 洗涤。
四、纯化与接种培养
细胞悬液接种培养瓶，差速贴壁纯化成纤维细胞。
2 天更换培养基，去除杂细胞与死细胞。
常规传代扩增培养。
